Superstart qPCR Premix plus-UNG
Katalógusszám: HCB5071E
A Superstart qPCR Premix plus-UNG egy speciális reagens, amelyet valós idejű PCR kvalitatív és kvantitatív reakciókhoz terveztek szondán alapuló detektálás segítségével, és kifejezetten liofilizálási folyamatokhoz fejlesztették ki.Egy új, melegindító Hotstart Taq plus (DG) enzimet tartalmaz, amelynek Taq enzimaktivitása szobahőmérsékleten zárt, hatékonyan gátolja a primer nem specifikus annealing vagy primer dimer képződése által okozott nem specifikus amplifikációt alacsony hőmérsékleten, így javítva. az amplifikációs reakció specifitása.Ez a reagens egy optimalizált qPCR-specifikus puffert és UNG/dUTP antikontaminációs rendszert használ a gyors melegindítás érdekében, nagymértékben javítva a qPCR-reakciók hatékonyságát és érzékenységét.Jó standard görbéket tud készíteni a mennyiségi meghatározási területek széles skáláján, és pontosan végez mennyiségi meghatározást, hatékonyan megelőzve a maradék PCR-termékek vagy aeroszolos szennyeződések által okozott hamis pozitív amplifikációt.Ez a reagens kompatibilis a legtöbb fluoreszcens kvantitatív PCR-műszerrel olyan gyártóktól, mint az Applied Biosystems, Eppendorf, Bio-Rad és Roche stb., és liofilizált formában jó stabilitást mutat.
A reagens összetétele
1. 5×HotstartPremix plus-UNG (Mg2+ingyenes) (DG)
2. 250 mM MgCl2
3. 4 × lyoprotektáns (opcionális)
Tárolási feltételek
Hosszú távú tárolás -20 ℃-on;4°C-on 3 hónapig tárolható.Használat előtt jól keverjük össze éskerülje az ismételt fagyasztást és felengedést.
Kerékpáros Protokoll
| Eljárás | Temp. | Idő | Ciklus |
| Emésztés | 50℃ | 2 perc | 1 |
| Polimeráz aktiválás | 95℃ | 1-5 perc | 1 |
| Denaturálás | 95℃ | 10-20 s | 40-50 |
| Lágyítás és meghosszabbítás | 56-64 ℃ | 20-60 s | 40-50 |
qPCR Liquid Reaction Syszár előkészítése
|
Fogalmazás |
25 µl térfogat |
50 µl térfogat |
Végső koncentráció |
| 5×HotstartPremix plus-UNG(Mg2+ingyenes) (DG) | 5 µl | 10 µl | 1× |
| 250 mM MgCl2 | 0,45 µl | 0,9 µl | 4,5 mM |
| 4×lyoprotektáns1 | 6,25 µl | 12,5 µl | 1× |
| 25× Primer-Probe Mix2 | 1 µl | 2 µl | 1× |
| Sablon DNS3 | —— | —— | —— |
| ddH2O | 25 µl-re | 50 µl-re | —— |
1. A primerek 0,2 μM végső koncentrációja általában jó eredményeket ad;ha a reakció gyenge, szükség szerint állítsa be a primer koncentrációját a 0,2-1 μM tartományba.A szonda koncentrációját általában 0,1-0,3 μM tartományban optimalizálják gradiens kísérletekkel az optimális kombinációk megtalálása érdekében.
2. A különböző típusú templátokban található célgének kópiaszáma változó;ha szükséges, gradiens hígítás végezhető az optimális templát hozzáadott mennyiség meghatározásához.
3. Ez a rendszer liofilizálható;ha az ügyfelek ezt a rendszert fagyasztás-szárítási követelmények nélkül használják, szelektíven 4 × lyoprotektáns adható hozzá; ha fagyasztva szárított termékekre van szükség, a folyékony reagensek szakaszában a termék teljesítményének ellenőrzése során 4 × liofilizáló anyagot kell hozzáadni a liofilizált rendszer összetevőivel való összhang biztosítása érdekében és hatások.
Amikor a rendszer használatban vand fagyasztva szárításhoz készítsük elő a rendszer as következő:
| Fogalmazás | 25µl Reakciórendszer |
| 5 × HotstartPremix plus-UNG (Mg2+ingyenes) (DG) | 5 µl |
| 250 mM MgCl2 | 0,45 µl |
| 4×lyoprotektáns | 6,25 µl |
| 25× Primer-Probe Mix | 1 µl |
| ddH2O | 18-20 µl-re |
* Ha a fagyasztva szárításhoz más rendszerekre van szükség, kérjük, külön tájékozódjon.
Liofilizálási eljárásss
| Eljárás | Temp. | Idő | Feltétel | Nyomás |
| Előfagyasztás | 4℃ | 30 perc | Tart |
1 atm |
| -50 ℃ | 60 perc | Hűtés | ||
| -50 ℃ | 180 perc | Tart | ||
| Elsődleges szárítás | -30 ℃ | 60 perc | Fűtés |
Végső vákuum |
| -30 ℃ | 70 perc | Tart | ||
| Másodlagos szárítás | 25℃ | 60 perc | Fűtés |
Végső vákuum |
| 25℃ | 300 perc | Tart |
2. A fenti liofilizálási eljárás csak tájékoztató jellegű.A különböző terméktípusok és a különböző fagyasztva szárítók eltérő paraméterekkel rendelkeznek, így az aktuális beállításoknak megfelelően módosíthatókfeltételek a használat során.
3. Különböző liofilizálási eljárások lehetnek alkalmasak a liofilizált termékek különböző tételeiheztermékek, ezért elegendő tesztelési validálást kell végezni, ha nagyüzemi gyártáshoz használják.
A liofilizálás használati utasításad por
1. Röviden centrifugálja a liofilizált port;
2. Adjunk hozzá nukleinsav templátot a liofilizált porhoz, és adjunk hozzá vizet 25 µl-ig;
3. Centrifugálással alaposan keverje össze, és futtassa gépen.
Minőség ellenőrzés:
1. Funkcionális tesztelés: qPCR érzékenysége, specificitása, reprodukálhatósága.
2. Nincs exogén nukleáz aktivitás, nincs exogén endo/exonukleáz szennyeződés.
Technikai információ:
1. A Superstart qPCR Premix plus-UNG egy új hot-start enzimet használ, amely 1-5 percen belül gyors melegindítást tesz lehetővé;speciális puffer összetételén keresztül alkalmas multiplex fluoreszcens kvantitatív PCR reakciókra.
2. Magasabb specificitású, ami jelentősen javítja a fluoreszcencia kvantitatív PCR határérték detektálásának érzékenységét, normalizálja az amplifikációs görbéket, a fluoreszcencia értéke nyilvánvaló javulást eredményez alacsony koncentrációjú templátoknál, alkalmas nagy érzékenységű fluoreszcencia kvantitatív PCR detektáló reagensekként.
3. Alacsonyabb kapcsolódási hőmérsékletű vagy 200 bp-nál hosszabb fragmentumokkal rendelkező primerek esetében a 3 lépéses módszer javasolt.
4. A dUTP hasznosítási hatékonysága és az UNG enzimre való érzékenysége a különböző célgének esetében eltérő, ezért ha az UNG rendszer használata a detektálási érzékenység csökkenéséhez vezet, akkor a reakciórendszert módosítani és optimalizálni kell.Ha technikai támogatásra van szüksége, forduljon cégünkhöz.
5. Az erősítés előtt és után használjon erre kijelölt területeket és pipettákat, használat közben viseljen kesztyűt, és gyakran cserélje ki azokat;ne nyissa ki a reakciócsövet a PCR befejezése után, hogy minimalizálja a minták PCR-termékekkel való szennyeződését.
