Rnase A
A ribonukleáz A (RNázA) egyszálú polipeptid, amely 4 diszulfidkötést tartalmaz, molekulatömege körülbelül 13,7 kDa.Az RNáz A egy endoribonukleáz, amely specifikusan lebontja az egyszálú RNS-t a C és U oldalláncoknál.Pontosabban, a hasítás felismeri a foszfodiészter kötést, amelyet egy nukleotid 5'-ribóza és a szomszédos pirimidin nukleotid 3'-ribózján lévő foszfátcsoport képez, így a 2, 3'-ciklusos foszfátok a megfelelő foszfáttá hidrolizálódnak. ′nukleozid-foszfátok (pl. a pG-pG-pC-pA-pG-t az RNáz A hasítja, így pG-pG-pCp és A-PG jön létre).Az RNáz A a legaktívabb az egyszálú RNS hasításában.Az ajánlott munkakoncentráció 1-100 μG/mL, kompatibilis a különböző reakciórendszerekkel.Alacsony sókoncentráció (0-100 mM NaCl) használható egyszálú RNS, kétszálú RNS és RNS-DNS hibridizációval létrejött RNS láncok vágására.Magas sókoncentrációnál (≥0,3 M) azonban az RNáz A csak specifikusan hasítja az egyszálú RNS-t.
Az RNáz A-t leggyakrabban az RNS eltávolítására használják a plazmid DNS vagy genomiális DNS előállítása során. Függetlenül attól, hogy a DNáz aktív-e az előállítási folyamat során, könnyen befolyásolhatja a reakciót.A DNáz aktivitás inaktiválására a vízfürdőben való forralás hagyományos módszere használható.Ez a termék nem tartalmaz DNázt és proteázt, és használat előtt nem igényel hőkezelést.Ezenkívül ez a termék molekuláris biológiai kísérletekben is felhasználható, például RNáz védelmi elemzésben és RNS szekvencia elemzésben.
Tárolási feltételek
A termék -25～-15℃-on tárolható, 2 évig érvényes.
Utasítás
Ez az egyik általános módszer az RNáz A tárolóoldat elkészítésére.Az is elkészíthetőegyéb módszerek a laboratóriumi vagy referencia irodalom hagyományos módszerei szerint (plközvetlenül feloldódik 10 mM Tris-HCl, pH 7,5 vagy Tris-NaCl oldatban)
1. 10 mg/ml RNáz A tárolóoldat készítéséhez használjon 10 mM nátrium-acetátot (pH 5,2).
2. Melegítés 100 ℃-on 15 percig
3. Hűtsük le szobahőmérsékletre, adjunk hozzá 1/10 térfogat 1 M Tris-HCl-t (pH 7,4), állítsuk be a pH-t 7,4-re (azpéldául adjunk hozzá 500 ml 10 g/ml RNáz tárolóoldatot, 1 M Tris-HCL, PH7,4)
4. -20 ℃-ra csomagolva fagyasztott tároláshoz, amely akár 2 évig is stabil.
[Megjegyzések]: Ha az RNázA oldatot semleges körülmények között forraljuk, RNáz csapadék képződik;Alacsonyabb pH-n forraljuk, és ha van csapadék, akkor ez megfigyelhető, amit fehérje szennyeződések jelenléte okozhat.Ha a forralás után üledéket talál, a szennyeződések nagy sebességű centrifugálással (13000 ford./perc) eltávolíthatók, majd fagyasztva tárolhatók.
Termék információ
| Szinonimák | ribonukleáz I;hasnyálmirigy ribonukleáz;ribonukleáz 3'-pirimidnooligonukleotid-hidroláz;Rnáz A;Endoribonulcease I |
| CAS-szám | 9001-99-4 |
| Kinézet | Fehér liofilizált por |
| Molekuláris tömeg | ~ 13,7 kDa (aminosavszekvencia) |
| PH érték | 7,6 (tevékenységtartomány 6-10) |
| Megfelelő hőmérséklet | 60 ℃ (aktivitási tartomány 15-70 ℃) |
| Aktiváló szer | Na2+.K+ |
| Inhibitor | Rnáz inhibitor |
| Inaktiválási módszer | Melegítéssel nem inaktiválható, centrifuga oszlop használata javasolt |
| Eredet | Szarvasmarha |
| Oldhatóság | Vízben oldódik (10mg/ml) |
| Veszteség szárazon | ≤5,0% |
| Enzimaktivitás | ≥60 Kunitz egység/mg |
| Izoelektromos pont | 9.6 |
Megjegyzések
Biztonsága és egészsége érdekében, kérjük, viseljen laborköpenyt és eldobható kesztyűt.
