Multiplex One Step RT-qPCR Premix-UNG
Katalógusszám: HCB5145A
A Multiplex One Step RT-qPCR Probe Kit (UDG Plus) egy multiplex kvantitatív PCR készlet, amely RNS-en alapul templátként.A kísérlet során ugyanabban a csőben reverz transzkripciót és kvantitatív PCR-t végeztünk, ami leegyszerűsítette a kísérleti műveletet és csökkentette a szennyeződés kockázatát.Ebben a kitben az első szál cDNS-t hatékonyan szintetizálták a hőálló reverz transzkriptázzal, és kvantitatívan amplifikálták a HotStart Tag DNS-polimerázzal.A készlet főleg optimalizált MP puffert, enzimkeveréket stb. tartalmaz. A pufferoldat már tartalmaz Mg-t2+és dNTP.Emellett hozzáadásra kerülnek azok a faktorok, amelyek hatékonyan gátolhatják a nem specifikus PCR amplifikációt és javíthatják több qPCR reakció amplifikációs hatékonyságát, amelyek biztosítják az amplifikációs hatékonyságot és akár többszörös amplifikációs reakciót is végrehajthatnak.A dUTP/UDG rendszert az aeroszolos szennyeződés kockázatának hatékony megelőzése érdekében adták hozzá.
Alkatrészek
1. Puffer
2. Enzimkeverék
Leírás
| Hot Start | Beépített melegindítás |
| Észlelési módszer | Primer-szonda érzékelés |
| PCR módszer | Egylépéses RT-qPCR |
| Polimeráz | Taq DNS polimeráz |
| A minta típusa | DNS |
Tárolási feltételek
A terméket szárazjéggel szállítjuk, és -25 ~ -15 ℃ között 1 évig tárolható.El kell kerülni a gyakorifagyasztás-olvadás.Érdemes külön menteni.
Utasítás
1.Reakció Rendszer
| Alkatrészek | Térfogat (μL) | Végső koncentráció |
| 2 × MP puffer | 12.5 | 1× |
| Enzimkeverék | 1 | - |
| Primer/szonda keverék (2,5 μM) | 3 | 0,3 μM |
| Templát RNS | 1-10 | - |
| RNáz mentes H2O | 25-ig | - |
Megjegyzések:
Használat előtt alaposan keverje össze, kerülje a heves vibráció okozta túlzott buborékok kialakulását.
a.Primer koncentráció: Primer keverék multiplex primerrel, a helyzettől függően az optimális primer koncentráció 0,l és 1,0 μM között lehet.
b.Szonda koncentrációja: Szonda keverék, amely multiplex szonda jelölési különbség fluoreszcens csoportot tartalmaz, a helyzettől függően az optimális próbakoncentráció 0,05 és 0,5 μM között lehet.
c.Template hígítás: A qPCR nagyon érzékeny, ezért ajánlott a templát hígítása.A kontroll Ct érték 20 és 35 között megfelelő.
d.A rendszer előkészítése: Kérjük, készítse elő az ultra tiszta munkaasztalon, valamint a pipettában és a reakciócsőben nukleázmaradvány nélkül.ajánlott a pisztolyfejet szűrőelemmel használni.Kerülje a keresztszennyeződést és az aeroszolos szennyeződést.
2. Optimalizált kerékpározásJegyzőkönyv
| Ciklus lépés | Temp. | Idő | Ciklusok |
| Fordított átírás | 50℃a | 20 perc | 1 |
| Kezdeti-denaturáció | 95℃ | 5 perc | 1 |
| Amplifikációs reakció | 95℃ | 15 mp |
40-45 |
| 60℃ b | 30 mp c |
Megjegyzések:
a.Fordított átírás: A hőmérséklet 42°C vagy 50°C között választható.
b.Amplifikációs reakció: A hőmérsékletet a tervezett primerek Tm értékének megfelelően állítjuk be.
c.Fluoreszcencia jel gyűjtése: Kérjük, állítsa be a kísérleti eljárást a műszer kézikönyvének követelményei szerint.
Megjegyzések
Kérjük, viselje a szükséges egyéni védőfelszerelést, például laborköpenyt és kesztyűt egészsége és biztonsága érdekében.
