Egér genotipizáló készlet

Katalógusszám: HCR2021A

Ez a termék egér genotípusok gyors azonosítására tervezett készlet, beleértve a nyers DNS extrakciót és a PCR amplifikációs rendszert.A termék felhasználható PCR-amplifikációhoz közvetlenül az egér farkából, fülből, lábujjból és más szövetekből, miután egyszerű hasítást végeztünk lízispufferrel és proteináz k-vel.Nincs éjszakai emésztés, fenol-kloroform extrakció vagy oszlopos tisztítás, ami egyszerű és lerövidíti a kísérletek időigényét.A termék alkalmas célfragmensek amplifikálására 2 kb-ig és multiplex PCR-reakciókhoz legfeljebb 3 primerpárral.A 2× Mouse Tissue Direct PCR Mix génmanipulált DNS polimerázt tartalmaz, Mg²⁺, dNTP-k és egy optimalizált pufferrendszer, amely magas amplifikációs hatékonyságot és inhibitor toleranciát biztosít, így a PCR-reakciók templát és primerek hozzáadásával és a termék 1×-es rehidratálásával hajthatók végre.Az ezzel a termékkel amplifikált PCR-termék 3'-végén kiemelkedő „A” bázis található, és tisztítás után közvetlenül használható TA klónozáshoz.

Alkatrészek

Tárolási feltételek

A termékeket -25 ~ -15 ℃ között kell tárolni 2 évig.Felolvasztás után a Lysis Buffer 2-8 ℃-on tárolható rövid távú többszöri használatra, és használat közben jól keverhető.

Alkalmazás

Ez a termék alkalmas egérkiütési elemzésre, transzgenikus kimutatásra, genotipizálásra és így tovább.

Jellemzők

1.Egyszerű kezelés: nincs szükség genomikus DNS kinyerésére;

2.Széleskörű alkalmazás: alkalmas különféle egérszövetek közvetlen amplifikálására.

Utasítás

1.A genomi DNS felszabadulása

1) Lizátum készítése

A szöveti lizátumot a lizálandó egérminták számának megfelelően készítik el (a szöveti lizátumot az adagolásnak megfelelően a helyszínen kell elkészíteni, és a felhasználáshoz alaposan össze kell keverni), és az egy mintához szükséges reagensek aránya a következő:

2) Minta-előkészítés és -lízis

Javasolt szövethasználat

Vegyen megfelelő mennyiségű egér szövetmintát tiszta centrifugacsövekbe, adjon 200 μl friss szöveti lizátumot minden centrifugacsőhöz, keverje össze és rázzuk össze, majd inkubálja 55 ℃-on 30 percig, majd melegítse 98 ℃-on 3 percig.

3) Centrifugálás

Jól rázza fel a lizátumot, és centrifugálja 12 000 fordulat/perc sebességgel 5 percig.A felülúszót templátként használhatjuk a PCR-amplifikációhoz.Ha a sablonra szükség van a tároláshoz, vigye át a felülúszót egy másik steril centrifugacsőbe, és tárolja -20 ℃-on 2 hétig.

2.PCR amplifikáció

Távolítsa el a 2×Mouse Tissue Direct PCR Mix-et -20 ℃-ról, és olvassa fel jégen, keverje össze fejjel lefelé, és készítse elő a PCR reakciórendszert a következő táblázat szerint (jégen működjön):

Jegyzet:

a) A hozzáadott mennyiség nem haladhatja meg a rendszer 1/10-ét, és ha túl sokat adunk hozzá, a PCR amplifikáció gátolható.

Ajánlott PCR-feltételek

Jegyzet:

a) Lágyítási hőmérséklet: Az alapozó Tm értékére való tekintettel javasolt a lágyítási hőmérsékletet a primer kisebb Tm értékére állítani +3~5 ℃.

Gyakori problémák és megoldások

1.Nincsenek célzott csíkok

1) Túl sok lízistermék.Válassza ki a legmegfelelőbb mennyiségű sablont, általában nem több, mint a rendszer 1/10-e;

2) Túl nagy mintaméret.Hígítsa fel a lizátumot 10-szer, majd amplifikálja, vagy csökkentse a minta méretét és újra lízist;

3) A szövetminták nem frissek.Javasoljuk, hogy friss szövetmintákat használjon;

4) Rossz minőségű alapozó.Használjon genomi DNS-t az amplifikációhoz a primer minőségének ellenőrzéséhez és a primer tervezésének optimalizálásához.

2.Nem specifikus erősítés

1) Az izzítási hőmérséklet túl alacsony és a ciklusszám túl magas.Növelje az izzítási hőmérsékletet és csökkentse a ciklusok számát;

2) A sablonkoncentráció túl magas.Csökkentse a templát mennyiségét vagy hígítsa fel 10-szer az amplifikáció után;

3) Gyenge primerspecifitás.Optimalizálja az alapozó kialakítását.

Megjegyzések

1.A minták közötti keresztszennyeződés elkerülése érdekében több mintavevő eszközt kell készíteni, és az eszközök felülete minden mintavétel után 2%-os nátrium-hipoklorit oldattal vagy nukleinsav tisztítószerrel tisztítható, ha ismételt használat szükséges.

2.Javasoljuk, hogy friss egérszövetet használjon, és a mintavételi térfogat ne legyen túl nagy, hogy ne befolyásolja az amplifikációs eredményeket.

3.A lízispuffernek kerülnie kell a gyakori fagyasztást és felengedést, és 2–8 °C-on tárolható rövid távú többszöri használathoz.Alacsony hőmérsékleten való tárolás esetén csapadék képződhet, ezért használat előtt teljesen fel kell oldani.

4.A PCR-keveréket kerülni kell a gyakori fagyasztást és felengedést, és 4 °C-on tárolható rövid távú ismételt felhasználáshoz.

5.Ez a termék kizárólag tudományos kísérleti kutatásra szolgál, és nem használható klinikai diagnózisra vagy kezelésre.