2×HiF Taq plus Master Mix
Katalógusszám: HCR2014B
A HIF Taq plus Master Mix (festékkel) egy használatra kész, 2× előkevert oldat, amely Plus HIF DNS polimerázt, dNTP-ket és optimalizált puffert tartalmaz.Szobahőmérsékleten két monoklonális antitestet adunk, amelyek gátolják a polimeráz aktivitást és a 3′→5′exonukleáz aktivitást, a mesterkeverékhez a könnyen és nagyon specifikus Hot Start PCR érdekében.Az extenziós faktort hozzáadjuk a master mixhez, hogy az enzim hosszú fragmentum-amplifikációs kapacitást kapjon, az amplifikáció hossza akár 13 kb is lehet, az enzim 5′→3′ DNS polimeráz aktivitással és 3′→5′ aktivitással rendelkezik. exonukleáz aktivitása, hűsége 83-szorosa a Taq DNS polimerázénak, ami 9-szerese a közönséges DNS polimerázénak.Komplex templátok amplifikálására alkalmas, az amplifikációs termék tompa végű.
A 2×HIF Taq plus Master Mix (festékkel) előnyei: gyors és egyszerű, nagy érzékenység, erős specificitás, jó stabilitás stb., a reakciórendszerhez csak primereket és templátokat kell hozzáadni, és két- lépésprotokoll, amely leegyszerűsíti a kísérleti lépéseket és időt takarít meg.Ez a termék elektroforézis indikátor festékeket tartalmaz, és a PCR termékek közvetlenül használhatók elektroforézishez.Ezenkívül a termék speciális védőanyagot is tartalmaz, így a mesterkeverék stabil aktivitást tarthat fenn ismételt fagyasztás-olvasztás után.
Tárolási feltételek
A termékeket -25-15°C-on kell tárolni 1 évig.
Műszaki adatok
| Termékleírás | Mester Mix |
| Koncentráció | 2× |
| Hot Start | Beépített Hot Start |
| Túlnyúlás | Tompa |
| Reakció sebessége | Gyors |
| Méret (végtermék) | Akár 13 kb |
| A szállítás feltételei | Szárazjég |
| Terméktípus | Nagy pontosságú PCR premixek |
Utasítás
1.PCR reakciórendszer
| Alkatrészek | Térfogat (μL) |
| DNS sablon | Alkalmas |
| Forward primer (10 μmol/L) | 2.5 |
| Fordított alapozó (10 μmol/L) | 2.5 |
| 2×HIF Taq plus Master Mix | 25 |
| ddH2O | 50-re |
2.Különböző sablonok javasolt használata
| A sablon típusa | A fragmentumok amplifikálása 1 kb-ról 10 kb-ra |
| Genomi DNS | 50 ng-200 ng |
| Plazmid vagy vírus DNS | 10pg-20ng |
| cDNS | 1-2,5 µL (ne haladja meg a végső PCR reakciótérfogat 10%-át) |
3.Erősítési Protokoll
1) Kétlépcsős protokoll (bonyolultsági sablon)
| Ciklus lépés | Temp. | Idő | Ciklusok |
| Kezdeti denaturáció | 98℃ | 3 perc | 1 |
| Denaturáció | 98℃ | 10 mp | 30-35 |
| Kiterjesztés | 68℃ | 30 mp/kb | |
| Végső hosszabbítás | 72℃ | 5 perc | 1 |
2) Háromlépcsős protokoll (normál protokoll)
| Ciklus lépés | Temp. | Idő | Ciklusok |
| Kezdeti denaturáció | 98℃ | 3 perc | 1 |
| Denaturáció | 98℃ | 10 mp | 30-35 |
| Lágyítás | 60℃ | 20 mp | |
| Kiterjesztés | 72℃ | 30 mp/kb | |
| Végső hosszabbítás | 72℃ | 5 perc | 1 |
3) A lágyítási gradiens protokoll (összetettségi sablon)
| Ciklus lépés | Hőfok | Idő | Ciklusok |
| Kezdeti denaturáció | 98℃ | 3 perc | 1 |
| Denaturáció | 98℃ | 10 mp | 15 (1 ℃ csökkentés ciklusonként) |
| Gradiens lágyítás | 70-55 ℃ | 20 mp | |
| Kiterjesztés | 72℃ | 30 mp/kb | |
| Denaturáció | 98℃ | 10 mp |
20 |
| Lágyítás | 55℃ | 20 mp | |
| Kiterjesztés | 72℃ | 30 mp/kb | |
| Végső hosszabbítás | 72℃ | 5 perc | 1 |
Jellemzők különböző erősítési protokollok alatt
| Protocol | Két lépés | Három lépés | Gradiens lágyítás |
| Spec. | gyors | közepes | lassú |
| Specificitás | magas | közepes | magas |
| PCR hozam | közepes | magas | közepes |
| Észlelési arány | magas | közepes | magas |
Megjegyzések
Kérjük, hogy egészsége és biztonsága érdekében viselje a szükséges PPE-t, például laborköpenyt és kesztyűt!
