Uracil DNS-glikoziláz
Az Uracil-DNS-glikoziláz (UNG vagy UDG) az E. coli rekombináns klónja, amelynek molekulatömege 25 kDa.Katalizálja a szabad uracil felszabadulását az uracil tartalmú egyszálú és kétszálú DNS-ből, és inaktív az RNS-sel szemben, és a PCR amplifikációs termékek szennyeződésének megelőzésére használható.A hatás elve azon alapul, hogy ha a PCR-reakcióban dUTP-vel helyettesítjük a dTTP-t, és dU-bázisokat tartalmazó PCR-amplifikációs termék képződik, az enzim szelektíven képes felbontani az U-bázisok glikozidos kötését egyszálú és kétszálú. DNS-t és lebontja a PCR amplifikációs terméket.
Ajánlott alkalmazás
Szennyezés megelőzés Felerősítés
Raktározási feltételek
-20°C hosszú távú tároláshoz, használat előtt alaposan fel kell keverni, kerülni kell a gyakori fagyasztást-olvadást.
Tárolópuffer
20 mM Tris-HCl (pH 8,0), 150 mM NaCl, 1 mM EDTA, 1 mM DTT, stabilizátor, 50% glicerin.
Mértékegység meghatározása
1 µg dU-bázist tartalmazó egyszálú DNS lebontásához szükséges enzimmennyiség 1 óra alatt 37°C-on 1 egység.
Minőség ellenőrzés
1.SDS-PAGE elektroforetikus tisztaság nagyobb, mint 98%
2.Erősítési érzékenység, tételről tételre szabályozás, stabilitás
3.Miután 1U UNG-t 50 ℃-on 2 percig kezeltünk, a 103 kópia alatti U-t tartalmazó sablonnak teljesen le kell bomlani, és nem képződhet amplifikációs termék.
4.Nincs exogén nukleáz aktivitás
Utasítás
| Alkatrészek | Térfogat (μL) | Végső koncentráció |
| 10 × PCR puffer (dNTP mentes, Mg²+ingyenes) | 5 | 1× |
| dUTP-k (dCTP, dGTP, dATP) | - | 200 μM |
| dUTP (a dTTP helyére) | - | 200-600 μM |
| 25 mM MgCl2 | 2-8 μL | 1-4 mM |
| 5 U/μL Taq | 0,25 | 1,25 U |
| 5 U/μL UNG | 0,25 (0,1-0,5) | 0,25 U (0,1-0,5) |
| 25 × Primer Mixa | 2 | 1× |
| Sablon | - | ＜1μg/reakció |
| ddH₂O | 50-re | - |
Jegyzet: a: Ha qPCR/qRT-PCR-hez használják, a fluoreszcens szondát hozzá kell adni a reakciórendszerhez.Általában a 0,2 μM végső primer koncentráció jó eredményt adhat;ha a reakció gyenge, a primer koncentrációja 0,2-1 μM tartományban állítható.Általában a próbakoncentráció 0,1-0,3 μM tartományban van optimalizálva.Koncentrációs gradiens kísérletek végezhetők a primer és a próba legjobb kombinációjának megtalálásához.
Megjegyzések
1.Az UNG enzim használható a szennyezett dUTP amplifikációs termékek eltávolítására a reakciórendszerből a PCR amplifikációs reakció előtt, majd a termékszennyezésből eredő álpozitív eredmények elkerülésére.
2.Az UNG enzim optimális hőmérséklete a szennyeződés elleni PCR reakcióban általában 50 ℃ 2 percig;az inaktiválási feltétel 95 ℃ 5 percig.
3.Kerülje a gyakori fagyasztást-olvadást, és ne tegye ki nagy hőmérséklet-ingadozásoknak.
4.A különböző amplifikálandó gének eltérő dUTP hasznosítási hatékonysággal és UNG enzimre való érzékenységgel rendelkeznek, ezért ha az UNG rendszer használata a detektálási érzékenység csökkenéséhez vezet, a reakciórendszert módosítani és optimalizálni kell, ha technikai segítségre van szüksége, kérjük, forduljon Cégünk.
