Univerzális SYBR GREEN qPCR Premix (kék)
Katalógusszám: HCB5041B
Az Universal Blue qPCR Master Mix (Dye Based) egy előmegoldás a 2-szeres valós idejű kvantitatív PCR-amplifikációhoz, amelyet nagy érzékenység és specifitás jellemez, kék színű, és mintaadási nyomkövető hatású.A Taq DNS-polimeráz központi komponense az antitest hot start-ot használja, hogy hatékonyan gátolja a minta-előkészítés során a primer annealing miatti nem specifikus amplifikációt.Ugyanakkor a képlet olyan elősegítő faktorokat ad hozzá, amelyek javítják a PCR reakció amplifikációs hatékonyságát és kiegyenlítik a különböző GC tartalmú gének amplifikációját (30 ~ 70%), így a kvantitatív PCR jó lineáris kapcsolatot tud elérni széles kvantitatív viszonylatban. vidék.Ez a termék speciális ROX Passive Reference Dye-t tartalmaz, amely a legtöbb qPCR műszerhez alkalmazható.Nem szükséges beállítani a ROX koncentrációját különböző műszereken.Csak primerek és templátok hozzáadása szükséges a reakciórendszer amplifikációra való előkészítéséhez.
Alkatrészek
Univerzális kék qPCR Master Mix
Tárolási feltételek
A terméket jégakkukkal együtt szállítjuk, és -25 ℃ ~ -15 ℃ között 18 hónapig tárolható.A reakciórendszer tárolása vagy elkészítése során kerülni kell az erős fénybesugárzást.
Leírás
| Koncentráció | 2× |
| Észlelési módszer | SYBR |
| PCR módszer | qPCR |
| Polimeráz | Taq DNS polimeráz |
| A minta típusa | DNS |
| Alkalmazási berendezések | A legtöbb qPCR műszer |
| Terméktípus | SYBR premix valós idejű fluoreszcens kvantitatív PCR-hez |
| Jelentkezés (jelentkezés) | Génexpresszió |
Utasítás
1.Reakciórendszer
| Alkatrészek | Volome (μL) | Volome (μL) | Végső koncentráció |
| Univerzális SYBR GREEN qPCR Premix | 25 | 10 | 1× |
| Forward Primer (10 μmol/L) | 1 | 0.4 | 0,2 μmol/L |
| Reverse Primer (10 μmol/L) | 1 | 0.4 | 0,2 μmol/L |
| DNS | X | X | |
| ddH2O | legfeljebb 50 | legfeljebb 20 | - |
[Megjegyzés]: Használat előtt alaposan keverje össze, hogy elkerülje az erőteljes rázásból származó túlzott buborékokat.
a) Primer koncentráció: A végső primer koncentráció 0,2 μmol/L, és szükség szerint 0,1 és 1,0 μmol/L között is állítható.
b) Templátkoncentráció: Ha a templát hígítatlan cDNS törzsoldat, a felhasznált térfogat nem haladhatja meg a qPCR reakció teljes térfogatának 1/10-ét.
c) Templát hígítás: A cDNS törzsoldatot 5-10-szeres hígítás javasolt.A hozzáadott templát optimális mennyisége jobb, ha az amplifikációval kapott Ct érték 20-30 ciklus.
d) Reakciórendszer: A célgén-amplifikáció hatékonyságának és ismételhetőségének biztosítása érdekében 20μL vagy 50μL használata javasolt.
e) A rendszer előkészítése: Kérjük, készüljön fel a szupertiszta padon, és használja a hegyeket és a reakciócsöveket nukleázmaradvány nélkül;a hegyek használata szűrőpatronokkal javasolt.Kerülje a keresztszennyeződést és az aeroszolos szennyeződést.
2.Reakció program
Standard program
| Ciklus lépés | Temp. | Idő | Ciklusok |
| Kezdeti denaturáció | 95℃ | 2 perc | 1 |
| Denaturáció | 95℃ | 10 mp | 40 |
| Lágyítás/kiterjesztés | 60℃ | 30 mp★ | |
| Olvadási görbe szakasza | A hangszer alapbeállításai | 1 | |
Gyors program
| Ciklus lépés | Temp. | Idő | Ciklusok |
| Kezdeti denaturáció | 95℃ | 30 mp | 1 |
| Denaturáció | 95℃ | 3 mp | 40 |
| Lágyítás/kiterjesztés | 60℃ | 20 mp★ | |
| Olvadási görbe szakasza | A hangszer alapbeállításai | 1 | |
[Megjegyzés]: A gyors program a gének túlnyomó többségére alkalmas, az egyes összetett másodlagos szerkezetű génekre pedig standard programok is kipróbálhatók.
a) A lágyítási hőmérséklet és idő: Kérjük, állítsa be a primer és a célgén hosszának megfelelően.
b) Fluoreszcencia jel gyűjtése (★): Kérjük, állítsa be a kísérleti eljárást a műszer használati útmutatójában szereplő követelményeknek megfelelően.
c) Olvadási görbe: A műszer alapértelmezett programja normál módon használható.
3. Eredményelemzés
A kvantitatív kísérletekhez legalább három biológiai ismétlésre volt szükség.A reakció után az amplifikációs görbét és az olvadási görbét meg kell erősíteni.
3.1 Erősítési görbe:
A szabványos erősítési görbe S alakú.A kvantitatív analízis akkor a legpontosabb, ha a Ct érték 20 és 30 közé esik. Ha a Ct érték kisebb, mint 10, akkor a templát hígítása és a vizsgálat újbóli elvégzése szükséges.Ha a Ct érték 30-35 között van, akkor a templátkoncentráció vagy a reakciórendszer térfogatának növelése szükséges az amplifikáció hatékonyságának javítása és az eredményelemzés pontosságának biztosítása érdekében.Ha a Ct érték nagyobb, mint 35, a teszteredmények nem képesek kvantitatívan elemezni a gén expresszióját, de kvalitatív elemzésre használhatók.
3.2 Olvadási görbe:
Az olvadási görbe egyetlen csúcsa azt jelzi, hogy a reakció specifitása jó, és kvantitatív elemzés végezhető;ha az olvadási görbe kettős vagy többszörös csúcsot mutat, kvantitatív elemzés nem végezhető el.Az olvadási görbe kettős csúcsokat mutat, és meg kell ítélni, hogy a nem célcsúcs primer dimer vagy nem specifikus amplifikáció DNS agaróz gél elektroforézissel.Ha primer dimerről van szó, akkor javasolt a primer koncentráció csökkentése vagy a nagy amplifikációs hatékonyságú primerek újratervezése.Ha nem specifikus amplifikációról van szó, kérjük, növelje a lágyítási hőmérsékletet, vagy tervezze újra a primereket specifikusan.
Megjegyzések
Kérjük, viselje a szükséges PPE-t, például laborköpenyt és kesztyűt egészsége és biztonsága érdekében!
Ez a termék CSAK kutatási célra szolgál!
