DNáz I (Rnázmentes) (5 e/ul)
Katalógusszám: HC4007A
A DNáz I (dezoxiribonukleáz I) egy endodezoxiribonukleáz, amely képes megemészteni az egy- vagy kétszálú DNS-t.Felismeri és felhasítja a foszfodiészter kötéseket, így monodezoxinukleotidokat vagy egy- vagy kétszálú oligodezoxinukleotidokat hoz létre, amelyek 5'-terminálisán foszfátcsoportok, 3'-terminálisán hidroxilcsoportok találhatók.A DNáz I aktivitása a Ca-tól függ2+és kétértékű fémionok, például Mn aktiválhatók2+és Zn2+.5 mM Ca2+megvédi az enzimet a hidrolízistől.Mg jelenlétében2+, az enzim véletlenszerűen képes felismerni és hasítani bármely helyet a DNS bármely szálán.Mn jelenlétében2+, a DNS kettős szálai egyidejűleg felismerhetők és szinte ugyanazon a helyen hasíthatók, így lapos végű DNS-fragmentumok vagy ragadós végű DNS-fragmensek képződnek, amelyekből 1-2 nukleotid nyúlik ki.
Alkatrészek
| Név | 0,1 KU | 1KU | 5 KU | 50 KU |
| DNáz I, RNáz mentes | 20μL | 200 μl | 1 ml | 10 ml |
| 10×DNáz I puffer | 1 ml | 1 ml | 5 × 1 ml | 5 × 10 ml |
Tárolási feltételek
-25 ℃ ~ -15 ℃ tároláshoz;Szállítás jégakkuk alatt.
Utasítás
1. Készítse elő a reakcióoldatot az RNáz-mentes csőben az alábbi arányok szerint:
| Összetevő | Hangerő |
| RNS | X µg |
| 10 × DNáz I puffer | 1 μL |
| DNáz I, RNáz-mentes (5U/μL) | 1 U per µg RNS① |
| ddH2O | 10 μL-ig |
Megjegyzés: ①Számítsa ki a hozzáadandó DNáz I mennyiségét az RNS mennyisége alapján.
2. 37 ℃ 15 percig;
3. Adjunk hozzá 0,5 M EDTA-t a 2,5 mM-5 mM végső koncentrációig, és melegítsük 65 °C-on 10 percig, hogy leállítsuk a reakciót.A minta közvetlenül felhasználható a következő reakcióhoz, például reverz transzkripcióhozkísérlet.
Mértékegység meghatározása
Egy egység az az enzimmennyiség, amely teljesen lebontja 1 µg pBR322-tDNS 10 perc alatt 37 ℃-on.
Minőség ellenőrzés
RNáz:5 egység DNáz I 1,6 µg MS2 RNS-sel 4 órán át 37 °C-on nem bomlik, mivelagaróz gélelektroforézissel határozzuk meg.
Megjegyzések
1. Kérjük, készítse el a 0,5MEDTA-t egyedül.
2. 1U DNáz I-et használjon µg RNS-enként.Ha azonban az RNS kevesebb, mint 1 µg, kérjük, használjon 1 U DNáz I-et.
3. Kérjük, helyezze az enzimet jégre működés közben.
