Bst 2.0 DNS-polimeráz (glicerinmentes)
A Bst DNS polimeráz V2 a Bacillus stearothermophilus DNS polimeráz I-ből származik, amely 5′→3′ DNS polimeráz aktivitással és erős láncpótló aktivitással rendelkezik, de nincs 5′→3′ exonukleáz aktivitása.A Bst DNA Polymerase V2 ideálisan alkalmas szálkiszorításra, izoterm amplifikációra, LAMP (Loop mediated izothermal amplifikáció) és gyors szekvenálásra.
Alkatrészek
| Összetevő | HC5005A-01 | HC5005A-02 | HC5005A-03 |
| BstDNApolymerase V2 (glicerinmentes) (8E/μL) | 0,2 ml | 1 ml | 10 ml |
| 10×HC Bst V2 puffer | 1,5 ml | 2×1,5 ml | 3×10 ml |
| MgSO4(100 mM) | 1,5 ml | 2×1,5 ml | 2×10 ml |
Alkalmazások
1.LAMP izoterm erősítés
2.DNS-szál egyetlen kiszorítási reakciója
3. Magas GC génszekvenálás
4. nanogramm szintű DNS szekvenálás.
Raktározási feltételek
Szállítás 0°C alatt és -25°C--15°C között tárolandó.
Mértékegység meghatározása
Egy egység az az enzimmennyiség, amely 65 °C-on 30 perc alatt 25 nmol dNTP-t épít be savban oldhatatlan anyagba.
Minőség ellenőrzés
1.Protein Purity Assay (SDS-PAGE):A Bst DNS polimeráz V2 tisztasága ≥99%-os SDS-PAGE analízissel Coomassie Blue detektálást alkalmazva.
2.Exonukleáz aktivitás:A legalább 8 U Bst DNS polimeráz V2-t tartalmazó 50 μl-es reakciót 1 μg λ-Hind Ⅲ emésztett DNS-sel 16 órán át 37 ℃-on inkubálják, a meghatározás szerint nem észlelhető lebomlás.
3.Nickase tevékenység:A legalább 8 U Bst DNS polimeráz V2-t tartalmazó 50 μl-es reakció 1 μg pBR322 DNS-sel 16 órán át 37 °C-on történő inkubálása nem eredményez kimutatható lebomlást a meghatározás szerint.
4.RNáz aktivitás:A legalább 8 U Bst DNS polimeráz V2-t tartalmazó 50 μl-es reakció 1,6 μg MS2 RNS-sel 16 órán át 37 °C-on történő inkubálása nem eredményez kimutatható lebomlást a meghatározás szerint.
5.E. coli DNS:120 U Bst DNS polimeráz V2-t E. coli genomiális DNS jelenlétére szkrínelünk TaqMan qPCR alkalmazásával, az E. coli 16S rRNS lókuszra specifikus primerekkel.Az E. coli genomi DNS-szennyezettsége ≤1 Copy.
LÁMPA reakció
| Alkatrészek | 25μL |
| 10×HC Bst V2 puffer | 2,5 μL |
| MgSO4 (100 mM) | 1,5 μL |
| dNTP-k (egyenként 10 mM) | 3,5 μL |
| SYTO™ 16 zöld (25×)a | 1,0 μL |
| Alapozó keverékb | 6 μL |
| Bst DNS polimeráz V2 (glicerinmentes) (8 U/uL) | 1 μL |
| Sablon | × μL |
| ddH₂O | 25 μL-ig |
Megjegyzések:
1) a.SYTOTM 16 Green (25×): Kísérleti igények szerint más színezékek is használhatók helyettesítőként;
2) b.Primer keverék: 20 µM FIP, 20 µM BIP, 2,5 µM F3, 2,5 µM B3, 5 µM LF, 5 µM LB és egyéb térfogatok összekeverésével nyerjük.
Reakció és állapot
1 × HC Bst V2 puffer, az inkubációs hőmérséklet 60°C és 65°C között van.
Hő inaktiválása
80 °C, 20 perc
