2×Sensi Direct Premix-UNG (Probe qPCR)
Katalógusszám: HCB5151A
A SensiDirect Premix-UNG (Probe qPCR) úgy lett kialakítva, hogy a PCR-t közvetlenül a mintákból végezze DNS-kivonás vagy minta-előkészítés nélkül.Ez a reagens melegindítású DNS-polimerázból, uracil DNS-glikozilázból (UNG), RNáz-inhibitorból, MgCl-ből áll.2dNTP-k (dTTP helyett dUTP-vel) és stabilizátorok a kvantitatív PCR-hez (qPCR).Ez a reagens magas inhibitor-toleranciát biztosít, így közvetlenül alkalmazható olyan minták kimutatására, mint a toroktampon, nyál, véralvadásgátló teljes vér, plazma és szérum DNS-kivonás nélkül.A reagens szabadalmaztatott puffert használ a qPCR-hez anti-inhibitor DNS polimeráz és UNG enzim kevert enzimeivel.Ezért képes a célgének jó amplifikációját elérni az inhibitorokat tartalmazó mintákban, és gátolja a PCR maradék és aeroszolszennyezés által okozott hamis pozitív amplifikációt.Ez a reagens kompatibilis a legtöbb fluoreszcens kvantitatív PCR-műszerrel, mint például az Applied Biosystems, Eppendorf, Bio-Rad, Roche és így tovább.
Alkatrészek
1. 50×SensiDirect enzim/UNG keverék
2. 2×SensiDirect Premix Buffer (dUTP)
Tárolási feltételek
Minden alkatrészt -20 ℃ hőmérsékleten kell tárolni a hosszú távú tároláshoz és 4 ℃ hőmérsékleten legfeljebb 3 hónapig.Felolvasztás után alaposan keverje össze, és felhasználás előtt centrifugálja meg.Kerülje a gyakori fagyasztást-olvadást.
Kerékpáros Protokoll
| Lépés | Hőfok | Idő | Ciklus |
| Emésztés | 50℃ | 2 perc | 1 |
| Polimeráz aktiválás | 95℃ | 1-5 perc | 1 |
| Denaturálás | 95℃ | 10-20 s | 40-50 |
| Lágyítás/kiterjesztés | 56-64 ℃ | 20-60-as évek |
Pipettázási utasítások
| Reagens | kötet per reakció | Térfogat reakciónként | Végső koncentráció |
| 2×SensiDirect Premix Buffer (dUTP) | 12,5 µl | 25 µl | 1× |
| 50×SensiDirect enzim/UNG keverék | 0,5 µl | 1 µl | 1× |
| 25× Primer-Probe Mix1, 2 | 1 µl | 2 µl | 1× |
| Minta3, 4 | - | - | - |
| ddH2O | - | - | - |
| Teljes hangerő | 25 μL | 50 μL | - |
1. A primer végső koncentrációja általában 0,2 μM.A jobb eredmények érdekében a primer koncentrációja 0,2-1 μM tartományban optimalizálható.
2. Általában a próbakoncentráció 0,1-0,3 μM tartományban optimalizálható.A próba optimális koncentrációja a valós idejű PCR amplifikációs műszertől, a próba típusától és a fluoreszcens jelölőanyag típusától függ.Kérjük, olvassa el a műszer kézikönyvét vagy az egyes fluoreszcens szondák speciális követelményeit.
3. A különböző típusú minták eltérő típusú és tartalmú inhibitort és kópiaszámú célgént tartalmaznak.A minta térfogatát a tényleges állapot szerint kell figyelembe venni.Ha szükséges, hígítsa meg a mintát nukleázmentes víz vagy TE puffer hozzáadásával.
4. Különböző minták javasolt mennyisége:
| Minta | Mennyiség egynek 50 μL reakció | Maximális hányados |
| Antikoagulált teljes vér | 2,5 μL | 5% |
| Vérplazma | 15 μL | 30% |
| Szérum | 10 μL | 20% |
| Torok tampon | 10 μL | 20% |
| Nyál | 10 μL | 20% |
Minőség ellenőrzés
1. Funkciódetektálás: a qPCR érzékenysége, specificitása és ismételhetősége.
2. Nincs exogén nukleáz aktivitás: nincs exogén endonukleáz és exonukleáz szennyezés.
Termék megjegyzései
1. Ez a termék egy új típusú hot-start DNS polimerázt alkalmaz, amely 1-5 perc alatt aktiválható. A reakciópuffer optimalizálása miatt alkalmasabb kettős vagy többszörös fluoreszcenciás kvantitatív PCR-re próba módszerrel.
2. Ha a PCR amplifikáció Rn értéke túl alacsony, vagy az amplifikáció nyilvánvalóan gátolt, a minta mennyiségének csökkentése, a reakciótérfogat növelése vagy a minta korábbi hígítása javíthatja az eredményeket.
3. A vér, nyál, vizelet, toroktampon stb. levételének követnie kell a klinikai kritériumok követelményeit, és a friss minta felhasználható a nukleinsav lebomlásának megelőzésére.
4. Mivel a különböző amplikonok eltérő hasznosítási hatékonysággal rendelkeznek a dUTP-től és érzékenyek az UNG-re, a reagenseket optimalizálni kell, ha az észlelési érzékenység csökken az UNG rendszer használatakor.Ha szükséges, forduljon hozzánk technikai támogatásért.
5. Az egylépéses reakciók közötti átviteli PCR-termékek amplifikációjának elkerülése érdekében külön kísérleti területre és pipettára van szükség az amplifikációhoz.Kesztyűben dolgozzon, és gyakran cserélje ki, és ne nyissa ki a reakciócsövet a PCR-amplifikáció után.
