UDG/UNG enzimek
Az UDG (uracil DNS-glikoziláz) képes katalizálni az ssDNS-ben és dsDNS-ben az uracilbázis és a cukor-foszfát gerince közötti N-glikozidos kapcsolat hidrolízisét.Könnyen szabályozza az aeroszolszennyezést, és alkalmas olyan általános molekuláris biológiai rendszerekhez, mint a PCR, qPCR, RT-qPCR és LAMP.
Műszaki adatok
| Expression Host | Rekombináns E. coli uracil DNS-glikoziláz génnel |
| Molekuláris tömeg | 24. 8 kDa |
| Tisztaság | ≥95% (SDS-PAGE) |
| Hő inaktiválása | 95 ℃, 5-10 perc |
| Mértékegység meghatározása | Egy egység (U) az az enzimmennyiség, amely szükséges ahhoz, hogy 1 μg dU-tartalmú dsDNS hidrolízisét 30 perc alatt 25 °C-on katalizálja. |
Tárolás
A terméket -25℃~-15°C-on két évig kell tárolni.
Utasítás
1.A PCR reakcióelegy elkészítése a következő rendszer szerint
| Alkatrészek | Térfogat (μL) | Végső koncentráció |
| 10×PCR puffer (Mg²+plus) | 5 | 1× |
| 25 mmol/LMgCl | 3 | 1,5 mmol/l |
| dUTP (10 mmol/L) | 3 | 0,6 mmol/l |
| dCTP/dGTP/dATP/dTTP (10 mmol/leach) | 1 | 0,2 mmol/lúg |
| Sablon DNS | X | - |
| Primer1 (10 μmol/L) | 2 | 0,4 μmol/L |
| Primer 2 (10 μmol/L) | 2 | 0,4 μmol/L |
| Taq DNS-polimeráz (5 U/μl) | 0. 5 | 0,05 U/μL |
| Uracil DNS-glikoziláz (UDG/UNG), 1 U/μL | 1 | 1 U/μL |
| ddH₂O | Legfeljebb 50 | - |
Jegyzet: A kísérleti követelményeknek megfelelően a dUTP végső koncentrációja 0,2-0,6 mmol/L között állítható, és szelektíven 0,2 mmol/L dTTP adható hozzá.
2.Az amplifikációs eljárás
| Ciklus lépés | Hőfok | Idő | Ciklusok |
| dU-tartalmú sablon degradáció | 25℃ | 10 perc | 1 |
| UDG aktiválás, sablon kezdeti denaturálás | 95℃ | 5-10 perc | 1 |
| Denaturáció | 95℃ | 10 mp |
30-35 |
| Lágyítás | 60℃ | 20 mp | |
| Kiterjesztés | 72℃ | 30 mp/kb | |
| Végső hosszabbítás | 72℃ | 5 perc | 1 |
Jegyzet: A reakcióidő 25°C-on 5-10 percen belül beállítható a kísérleti követelményeknek megfelelően.
Megjegyzések
1.Az UDG a legtöbb PCR reakciópufferben aktív.
2.Az enzimeket használatkor jégszekrényben vagy jeges fürdőben kell tárolni, és használat után azonnal -20°C-on kell tárolni.
3.Kérjük, hogy egészsége és biztonsága érdekében viselje a szükséges PPE-t, például laborköpenyt és kesztyűt!
