Hőmérsékletérzékeny UNG
A hőmérsékletérzékeny UNG-t (TS-UNG) E. coliban rekombináns expresszióval nyerik.Az enzim katalizálja a szabad uracil felszabadulását az uracil tartalmú egy- és kétszálú DNS-ből, és inaktív az RNS-sel szemben.A hagyományos E. coli géneredetű UNG enzimhez képest a TS-UNG enzim alacsonyabb hőmérsékleten (20 ℃ ~ 37 ℃) nagyobb aktivitást mutat, hőmérsékletérzékeny és könnyen inaktiválható (50 ℃), elkerülve a dUTP-t tartalmazó amplifikáció lebomlását. szobahőmérsékleten a maradék aktivitással, amely a hagyományos UNG enzim inaktiválása után megmaradhat.Ezért a TS-UNG enzim nem csak PCR szennyeződés-megelőzési reakcióra alkalmas, hanem jól illeszkedik az RT-PCR amplifikációs programhoz, és felhasználható RT-PCR szennyeződés-megelőzési reakcióban.
Ajánlott alkalmazás
Szennyezés megelőzés Felerősítés
Raktározási feltételek
-20°C hosszú távú tároláshoz, használat előtt alaposan fel kell keverni, kerülni kell a gyakori fagyasztást-olvadást.
Tárolópuffer
20 mM Tris-HCl (pH 7,5), 100 mM NaCl, 0,1 mM EDTA, 1 mM DTT, stabilizátor, 50% glicerin.
Mértékegység meghatározása
1 µg dU-bázist tartalmazó egyszálú DNS lebontásához szükséges enzimmennyiség 1 óra alatt 37 °C-on 1 egységnyi aktivitás (U).
Minőség ellenőrzés
1.SDS-PAGE elektroforetikus tisztaság nagyobb, mint 98%
2.Lebomlási aktivitás, tételenkénti ellenőrzés, stabilitás
3.Nincs exogén nukleáz aktivitás, nincs exogén endonukleáz vagy exonukleáz szennyeződés.
Utasítás
| Alkatrészek | Térfogat (μL) | Végső koncentráció |
| 10 × PCR puffer (dNTP mentes, Mg²+ingyenes) | 5 | 1× |
| dUTP-k (dCTP, dGTP, dATP) | - | 200 μM |
| dUTP (a dTTP helyére) | - | 200-600 μM |
| 25 mM MgCl2 | 2-8 μL | 1-4 mM |
| 5 U/μL Taq | 0,25 | 1,25 U |
| 1 U/μLTS-UNG | 0,5 (0,1-0,5) | 0,5 U (0,1-0,5 U) |
| 25 × Primer Mixa | 2 | 1× |
| Sablon | - | ＜1μg/reakció |
| ddH₂O | 50-re | - |
Megjegyzés: a: Ha qPCR/qRT-PCR-hez használják, a fluoreszcens szondát hozzá kell adni a reakciórendszerhez.Általában a 0,2 μM végső primer koncentráció jó eredményt adhat;ha a reakció gyenge, a primer koncentrációja 0,2-1 μM tartományban állítható.Általában a próbakoncentráció 0,1-0,3 μM tartományban van optimalizálva.Koncentrációs gradiens kísérletek végezhetők a primer és a próba legjobb kombinációjának megtalálásához.
Megjegyzések
1.A TS-UNG enzim optimális reakcióhőmérséklete viszonylag alacsony, és 20℃~37℃ tartományban optimalizálható, az enzim adagolása és a reakcióidő 0,1~0,5 U, 5~ tartományban optimalizálható. 10 perc;és az enzim inaktiválható a reverz transzkripció folyamatában.
2.Alkalmas PCR-re és RT-PCR-re a szennyeződés megelőzésére.
3.Kerülje a gyakori fagyasztást-olvadást, és ne tegye ki nagy hőmérséklet-ingadozásoknak.
4.A különböző amplifikálandó gének eltérő dUTP hasznosítási hatékonysággal és UNG enzimre való érzékenységgel rendelkeznek, ezért ha az UNG rendszer használata a detektálási érzékenység csökkenéséhez vezet, a reakciórendszert módosítani és optimalizálni kell, ha technikai segítségre van szüksége, kérjük, forduljon Cégünk.
