Robustart Taq DNS polimeráz

A Robustart Taq DNS polimeráz egy hot start DNS polimeráz.Ez a termék nem csak jobban gátolja a primerek nem specifikus annealingja vagy primer aggregációja által okozott nem specifikus reakciót a PCR rendszer előkészítése és amplifikációja során.Emiatt kiváló specificitással rendelkezik, és hatékonyabb az alacsony koncentrációjú templátok amplifikálására, valamint alkalmas multiplex PCR amplifikációs reakcióra.Ezen túlmenően ennek a terméknek nagyon jó az alkalmazhatósága, és stabil amplifikációs eredmények érhetők el különböző típusú PCR reakciókban.

Alkatrészek

1.5 U/μL Robustart Taq DNS polimeráz

2.10 × PCR Buffer II (Mg²+ mentes) (opcionális)

3.25 mM MgCl₂(választható)

* A 10 × PCR Buffer II (Mg²+ mentes) nem tartalmaz dNTP-t és Mg²+-t, kérjük, adjon hozzá dNTP-ket és MgCl-t₂a reakciórendszer elkészítésekor.

Ajánlott alkalmazások

1.Gyors erősítés.

2.Többszörös erősítés.

3.Vér, tampon és egyéb minták közvetlen amplifikációja.

4.Légúti betegségek kimutatása.

Raktározási feltételek

-20°C hosszú távú tároláshoz, használat előtt alaposan fel kell keverni, kerülni kell a gyakori fagyasztást-olvadást.

*Ha a hűtés után csapadék keletkezik, az normális;keverés és felhasználás előtt ajánlatos szobahőmérsékletűre egyensúlyozni.

Mértékegység meghatározása

Egy aktív egység (U) az az enzimmennyiség, amely 10 nmol dezoxiribonukleotidot épít be savban oldhatatlan anyagba 74 °C-on 30 percig, templátként/primerként aktivált lazacsperma DNS-t használva.

Minőség ellenőrzés

1.SDS-PAGE elektroforetikus tisztaság nagyobb, mint 98%.

2.Erősítési érzékenység, tételről tételre szabályozás, stabilitás.

3.Nincs exogén nukleáz aktivitás, nincs exogén endonukleáz vagy exonukleáz szennyeződés

Utasítás

Reakció beállítása

Megjegyzések:

1) a.A puffer nem tartalmaz dNTP-t és Mg²+-t, kérjük, adjon hozzá dNTP-ket és MgCl-t₂a reakciórendszer elkészítésekor.

2) b.Ha qPCR/qRT-PCR-hez használják, fluoreszcens szondákat kell hozzáadni a reakciórendszerhez.Általában a 0,2 μM végső primer koncentráció jó eredményt ad;ha a reakció gyenge, a primer koncentrációja 0,2-1 μM tartományban állítható.A próbakoncentrációt általában 0,1-0,3 μM tartományban optimalizálják.Koncentrációs gradiens kísérletek végezhetők a primer és a próba legjobb kombinációjának megtalálásához.

Termikus kerékpározási protokoll

Megjegyzések

1.A gyors DNS-polimeráz amplifikációs sebessége nem lehet kevesebb, mint 1 kb/10 s.A különböző PCR műszerek hőmérséklet-emelkedési és -esési sebessége, hőmérsékletszabályozási módja és hővezetési hatásfoka nagymértékben eltér egymástól, ezért javasolt az adott gyors PCR műszer optimális reakciókörülményeinek optimalizálása.

2.A rendszer nagymértékben alkalmazkodóképes, nagyobb specifitással és érzékenységgel.

3.Alkalmas nagy érzékenységű PCR detektáló reagensként való használatra, és használható multiplex PCR amplifikációs reakciókban.

4.5′→3′ polimeráz aktivitás, 5′→3′ exonukleáz aktivitás;nincs 3′→5′ exonukleáz aktivitás;nincs korrektúra funkció.

5.Alkalmas PCR és RT-PCR kvalitatív és kvantitatív tesztelésére.

6.A PCR-termék 3'-vége A, amely közvetlenül klónozható egy T-vektorba.

7.A háromlépéses módszert alacsony annealing hőmérsékletű primerekhez vagy 200 bp-nál hosszabb fragmentumok amplifikálásához ajánljuk.