One Step RT-qPCR SYBR Green Premix
Katalógusszám: HCB5140A
A One Step RT-qPCR Syber Green Premix a SYBR Green I festéken alapuló fluoreszcencia mennyiségi meghatározására szolgál.Génspecifikus primerek használatával a reverz transzkripció és a qPCR reakciók egy csőben fejeződnek be, így nincs szükség ismételt kupaknyitási és pipettázási műveletekre, nagymértékben javítva a vizsgálat hatékonyságát és csökkentve a szennyeződés kockázatát.Az RNS-minták esetében a készlet hőálló reverz transzkriptázt alkalmaz a hatékony cDNS-szintézis érdekében, és HotStart Taq DNS-polimerázt a kvantitatív amplifikációhoz.Az optimalizált pufferrendszerben a készlet érzékenysége akár 0,1 pg is lehet erősen kifejezett célpontok esetén, és akár 1 pg is közepesen kifejezett célpontok esetén.A készlet alkalmas DNS-minták amplifikálására és mennyiségi meghatározására.Lehetővé teszi a különböző növényi és állati mintákból, sejtekből és mikroorganizmusokból származó nukleinsavak érzékeny kimutatását és mennyiségi meghatározását.
Alkatrészek
| No | Név | Hangerő | Hangerő |
| 1 | Speciális puffer | 250 μL | 2×1,25 ml |
| 2 | Advanced Enzyme Mix | 20 μL | 200 μL |
| 3 | RNáz mentes H2O | 250 μL | 2×1,25 ml |
Tárolási feltételek
Ezt a terméket -25-15°C-on, fénytől védve kell tárolni 1 évig.
Utasítás
1. Reakciórendszer konfigurációjad
| Alkatrészek | Térfogat (μL) | Térfogat (μL) | Végső koncentráció |
| Speciális puffer | 12.5 | 25 | 1× |
| Advanced Enzyme Mix | 1 | 2 | - |
| Forward Primer (10 μmol/L)a | 0.5 | 1 | 0,2 μmol/L |
| Fordított alapozó (10 μmol/L)a | 0.5 | 1 | 0,2 μmol/L |
| RNA Tamplateb | X | X | - |
| RNáz mentes H2Oc | 25-ig | 50-re | - |
Megjegyzések:
1) a.TA primer végső koncentrációja 0,2 μmol/L volt, amely szintén 0,1 és 1 μmol/L között változtatható.
2) b.A reagens rendkívül érzékeny, a teljes RNS-értéke 1 pg-1 μg tartományban van, és a humán minták vizsgálata 1 pg-100 ng optimális bemenetet mutatott ki, a teljes Ct értéket 15-30 tartományban szabályozva.
3) c.A célgén-amplifikáció érvényességének és reprodukálhatóságának biztosítása érdekében 20μL vagy 50μL használata javasolt.
4) d.Kérjük, készüljön fel az ultra-tiszta padon, és használjon nukleáz-maradékmentes hegyeket és reakciócsöveket;szűrőpatronokkal ellátott hegyek ajánlottak.Kerülje a keresztszennyeződést és az aeroszolos szennyeződést.
2.Reakció program
| Ciklus lépés | Temp. | Idő | Ciklusok |
| Fordított átírás | 50℃a | 6 perc | 1 |
| Kezdeti denaturáció | 95℃ | 5 perc | 1 |
| Amplifikációs reakció | 95℃ | 15 mp | 40 |
| 60℃b | 30 mp | ||
| Olvadási görbe szakasza | A hangszer alapbeállításai | 1 | |
Megjegyzések:
1) a.A reverz transzkripció hőmérséklete a kísérleti igényeknek megfelelően 50-55°C között választható.DNS-minták esetében a reverz transzkripciós folyamat elhagyható.
2) b.Speciális esetekben a lágyítási/nyújtási hőmérséklet az alapozó Tm értékének megfelelően állítható, 60°C javasolt.
Megjegyzések
1. Ez a termék kizárólag kutatási célra szolgál.
2. Biztonsága érdekében laborköpenyben és eldobható kesztyűben dolgozzon.
