Rnáz-gátló (glicerinmentes)
Az egér RNáz inhibitor egy rekombináns egér RNáz inhibitor E. coliból expresszálva és tisztítva.Nem kovalens kötéssel 1:1 arányban kötődik az RNáz A-hoz, B-hez vagy C-hez, ezáltal gátolja a három enzim aktivitását és megvédi az RNS-t a lebomlástól.Azonban nem hatásos az Aspergillusból származó RNáz 1, RNáz T1, S1 nukleáz, RNáz H vagy RNáz ellen.Az egér RNáz inhibitort RT-PCR-rel, RT-qPCR-rel és IVT mRNS-sel tesztelték, és kompatibilis volt különféle kereskedelmi reverz transzkriptázokkal, DNS polimerázokkal és RNS polimerázokkal.
A humán RNáz inhibitorokhoz képest az egér RNáz inhibitor nem tartalmaz két ciszteint, amelyek nagyon érzékenyek az oxidációra, ami az inhibitor inaktiválását okozza.Ez stabillá teszi alacsony DTT-koncentrációnál (kevesebb, mint 1 mM).Ez a tulajdonsága alkalmassá teszi olyan reakciókban történő alkalmazásra, ahol a DTT nagy koncentrációja káros a reakcióra (pl. valós idejű RT-PCR).
Aalkalmazás
Ez a termék széles körben alkalmazható minden olyan kísérletben, ahol az RNáz interferencia lehetséges az RNS lebomlásának elkerülése érdekében, mint például:
1. Első szálú cDNS szintézis, RT-PCR, RT-qPCR stb.;
2.Védje meg az RNS-t a lebomlástól in vitro transzkripció/transzláció során (pl. vírus replikációja in vitro);
3. Az RNáz aktivitás gátlása az RNS izolálása és tisztítása során.
Tárolási feltételek
Tárolás -25 ～-15 ℃ hőmérsékleten;
Fagyasztási-olvadási ciklusok ≤ 5-ször;
1 évig érvényes.
Mértékegység meghatározása
Egy egység az RNáz Inhibitor mennyisége, amely ahhoz szükséges, hogy 5 ng RNáz A aktivitását 50%-kal gátolja.
Molekuláris tömeg
Az RNáz Inhibitor (glicerinmentes) egy 50 kDa-os fehérje.
Minőség ellenőrzés
Exonukleáz Tevékenység:
40 U enzimet 1 μg λ-Hind III emésztett DNS-sel 16 órán át 37 °C-on inkubáltunk, és gélelektroforézissel meghatározva nem észlelhető a DNS degradációja.
Endonukleáz aktivitás:
40 U enzim 1 μg λ DNS-sel 16 órán át 37 °C-on történő inkubálása a DNS gélelektroforézissel meghatározott kimutatható lebomlását eredményezte.
Nicking Tevékenység:
40 U enzim 1 μg pBR322-vel 16 órán át 37 °C-on történő inkubálása nem eredményezett kimutatható DNS degradációt gélelektroforézissel meghatározva.
RNáz Tevékenység:
40 U enzim 1,6 μg MS2 RNS-sel történő inkubálása 4 órán át, 37 °C-on az RNS kimutatható lebomlását nem eredményezte, amint azt gélelektroforézissel meghatároztuk.
E.coli DNS:
40 U enzimet detektált a TaqMan qPCR.Az E. coli DNS ≤ 0,1 pg/40 U.
Nmegjegyzéss
1. Ne rázza vagy keverje erősen, hogy megakadályozza az enziminaktivációt.
2. Az RNáz inhibitor 25 ℃ és 55 ℃ közötti hőmérsékleten aktív, és ≥ 65 ℃ hőmérsékleten inaktiválódik.
3. Az RNáz H, RNáz 1 és RNáz T1 aktivitása nem gátolt.
4. Az RNáz aktivitás gátlásának pH-tartománya széles (pH 5-9 között aktív), maximális aktivitást 7-8 pH-értéknél mutat.
