M-MLV reverz transzkriptáz
A RevScript reverz transzkriptázt géntechnológiai technológiával nyerik.Magasabb a cDNS szintézis képessége, termikus stabilitása és a reakcióhőmérséklet határa (60°C-ig).A szintetizált cDNS termék legfeljebb 10 kb méretű.Növeli a templátok affinitását, és alkalmas összetett másodlagos szerkezetű vagy alacsony kópiaszámú génekkel rendelkező RNS-templátok reverz transzkripciójára.
Alkatrészek
| Összetevő | HC2003B-01 (10 000 U) | HC2003B-02 (5*10 000 U) | HC2003B-03 (200 000 U) |
| RevScript reverz transzkriptáz (200E/μL) | 50 μL | 5×50 μL | 1 ml |
| 5 × RevScript puffer | 250 μL | 1,25 ml | 5 ml |
Raktározási feltételek
Ezt a terméket -25°C és -15°C közötti hőmérsékleten 2 évig kell tárolni.
Mértékegység meghatározása
Egy egység 1 nmol dTTP-t tartalmaz savban oldhatatlan anyagba 10 perc alatt 37 °C-on, Oligo(dT) primerként.
Reakció beállítása
1. Az RNS-templát denaturálása (Ez a lépés nem kötelező, az RNS-templát denaturálása segít a másodlagos struktúrák megnyitásában, ami javítja az első szál cDNS hozamát.)
| Alkatrészek | Hangerő (μL) |
| RNáz mentes ddH2O | 13-ra |
| Oligo(dT)18 (50 μmol/L) vagy Random Primer (50 μmol/L) Vagy génspecifikus primerek (2 μmol/L) | 1 |
| vagy 1 | |
| vagy 1 | |
| RNS templát | xa |
Megjegyzések:
1) a: Teljes RNS: 1-5 ug vagy mRNS: 1-500 ng
2) Inkubáljuk 65 °C-on 5 percig, majd azonnal tegyük jégre, hogy hűtsük 2 percig.Rövid centrifugálás a reakciófolyadék összegyűjtéséhez, adjuk hozzá a reverz transzkripciós reakcióoldatot a következő táblázat szerint.Finoman pipettázzon a keveréshez.
1. A reakcióelegy elkészítése (20 μL térfogat)
| Alkatrészek | Hangerő (μL) |
| Az előző lépés keveréke | 13 |
| 5×puffer | 4 |
| dNTP keverék (10 nmol/l) | 1 |
| Reverz transzkriptáz (200 U/μL) | 1 |
| RNáz inhibitor (40 U/μl) | 1 |
1.Hajtsa végre a reakciót a következő feltételek mellett:
| Hőmérséklet (°C) | Idő |
| 25 °Ca | 5 perc |
| 42 °Cb | 15-30 perc |
| 85 °Cc | 5 perc |
Megjegyzések:
1) a.A 25 °C-on 5 percig tartó inkubálás csak a véletlenszerű hexamerek használatához szükséges.Kérjük, hagyja ki ezt a lépést az Oligo (dT) használatakor18vagy Gene Specific Primer.
2) b.Az ajánlott reverz transzkripciós hőmérséklet 42°C. Bonyolult másodlagos szerkezetű vagy magas GC-tartalmú templátok esetén javasolt a reakcióhőmérsékletet 50-55°C-ra emelni.
3) c.Hevítés 85 °C-on 5 percig a reverz transzkriptáz inaktiválásához.
4) A termék közvetlenül felhasználható PCR vagy qPCR reakciókban, vagy -20°C-on tárolható rövid távú tárolás céljából.Javasoljuk, hogy a termékeket kiegyenlítse és -80°C-on tárolja a hosszú távú tárolás érdekében.Kerülje a gyakori fagyasztást-olvadást.
5) A termék alkalmas egylépéses RT-qPCR-re, minden 25μL reakciórendszerhez 10-20 U reverz transzkriptáz hozzáadása javasolt, vagy a reverz transzkriptáz mennyiségének fokozatos növelése az aktuális helyzetnek megfelelően.
Megjegyzések
1.Kérjük, tartsa tisztán a kísérleti területet;Működés közben tiszta kesztyűt és maszkot kell viselni.A kísérletben használt összes fogyóeszköznek RNáz-mentesnek kell lennie az RNáz szennyeződés megelőzése érdekében.
2. Minden eljárást jégen kell végrehajtani, hogy megakadályozzuk az RNS lebomlását.
3. A reverz transzkripció magas hatékonyságának biztosítása érdekében jó minőségű RNS minták vétele javasolt.
4. Ez a termék kizárólag kutatási célra szolgál.
5. Biztonsága érdekében laborköpenyben és eldobható kesztyűben dolgozzon.
