M-MLV reverz transzkriptáz
A RevScript reverz transzkriptázt géntechnológiai technológiával nyerik.Magasabb a cDNS szintézis képessége, termikus stabilitása és a reakcióhőmérséklet határa (60°C-ig).A szintetizált cDNS termék legfeljebb 10 kb méretű.Növeli a templátok affinitását, és alkalmas összetett másodlagos szerkezetű vagy alacsony kópiaszámú génekkel rendelkező RNS-templátok reverz transzkripciójára.
Alkatrészek
| Összetevő | HC2003B (10 000 U) | HC2003B (5*10 000 U) | HC2003B (200 000 U) |
| RevScript reverz transzkriptáz (200E/μL) | 50 μL | 5×50 μL | 1 ml |
| 5 × RevScript puffer | 250 μL | 1,25 ml | 5 ml |
Raktározási feltételek
Ezt a terméket -25°C és -15°C közötti hőmérsékleten 2 évig kell tárolni.
Mértékegység meghatározása
Egy egység 1 nmol dTTP-t tartalmaz savban oldhatatlan anyagba 10 perc alatt 37 °C-on, Oligo(dT) primerként.
Reakció beállítása
1.Az RNS-templát denaturálása (Ez a lépés nem kötelező, az RNS-templát denaturálása segít a másodlagos struktúrák megnyitásában, ami javítja az első szál cDNS hozamát.)
| Alkatrészek | Hangerő (μL) |
| RNáz mentes ddH2O | 13-ra |
| Oligo(dT)18 (50 μmol/L) vagy Random Primer (50 μmol/L) Vagy génspecifikus primerek (2 μmol/L) | 1 |
| vagy 1 | |
| vagy 1 | |
| RNS templát | X a |
Megjegyzések:
1) a: Teljes RNS: 1-5 ug vagy mRNS: 1-500 ng
2) Inkubáljuk 65 °C-on 5 percig, majd azonnal tegyük jégre, hogy hűtsük 2 percig.Rövid centrifugálás a reakciófolyadék összegyűjtéséhez, adjuk hozzá a reverz transzkripciós reakcióoldatot a következő táblázat szerint.Finoman pipettázzon a keveréshez.
1.A reakcióelegy elkészítése (20 μl térfogat)
| Alkatrészek | Hangerő (μL) |
| Az előző lépés keveréke | 13 |
| 5×puffer | 4 |
| dNTP keverék (10 nmol/l) | 1 |
| Reverz transzkriptáz (200 U/μL) | 1 |
| RNáz inhibitor (40 U/μl) | 1 |
1.Hajtsa végre a reakciót a következő feltételek mellett:
| Hőmérséklet (°C) | Idő |
| 25 °Ca | 5 perc |
| 42 °Cb | 15-30 perc |
| 85 °Cc | 5 perc |
Megjegyzések:
1) a.A 25 °C-on 5 percig tartó inkubálás csak a véletlenszerű hexamerek használatához szükséges.Kérjük, hagyja ki ezt a lépést az Oligo (dT) használatakor18vagy Gene Specific Primer.
2) b.Az ajánlott reverz transzkripciós hőmérséklet 42°C. Bonyolult másodlagos szerkezetű vagy magas GC-tartalmú templátok esetén javasolt a reakcióhőmérsékletet 50-55°C-ra emelni.
3) c.Hevítés 85 °C-on 5 percig a reverz transzkriptáz inaktiválásához.
4) A termék közvetlenül felhasználható PCR vagy qPCR reakciókban, vagy -20°C-on tárolható rövid távú tárolás céljából.Javasoljuk, hogy a termékeket kiegyenlítse és -80°C-on tárolja a hosszú távú tárolás érdekében.Kerülje a gyakori fagyasztást-olvadást.
5) A termék alkalmas egylépéses RT-qPCR-re, minden 25μL reakciórendszerhez 10-20 U reverz transzkriptáz hozzáadása javasolt, vagy a reverz transzkriptáz mennyiségének fokozatos növelése az aktuális helyzetnek megfelelően.
Megjegyzések
1.Kérjük, tartsa tisztán a kísérleti területet;Működés közben tiszta kesztyűt és maszkot kell viselni.A kísérletben használt összes fogyóeszköznek RNáz-mentesnek kell lennie az RNáz szennyeződés megelőzése érdekében.
2.Az RNS lebomlásának megakadályozása érdekében minden eljárást jégen kell végrehajtani.
3.A reverz transzkripció magas hatékonyságának biztosítása érdekében jó minőségű RNS minták ajánlottak.
4.Ez a termék kizárólag kutatási célra szolgál.
5.Kérjük, a biztonsága érdekében laborköpenyben és eldobható kesztyűben dolgozzon.
