CHO HCP ELISA Kit
Ebben a vizsgálatban egylépéses immunszorbens ELISA módszert alkalmaznak.A CHOK1 HCP-t tartalmazó minták egyidejűleg reagálnak a HRP-vel jelölt kecske anti-CHOK1 antitesttel és az ELISA lemezre bevont anti-CHOK1 antitesttel, végül szilárd fázisú antitest-HCP-jelölt antitestből álló szendvicskomplexet alkotnak.A meg nem kötött antigén-antitest az ELISA lemez mosásával eltávolítható.A megfelelő reakció érdekében a TMB szubsztrátot hozzáadjuk a lyukhoz.A színfejlődést a stopoldat hozzáadása után leállítjuk, és a reakcióoldat OD vagy abszorbancia értékét 450/650 nm-en mikrolemez-leolvasóval leolvassuk.Az OD érték vagy abszorbancia érték arányos az oldat HCP-tartalmával.Ebből a standard görbe szerint kiszámítható az oldatban lévő HCP koncentráció.
Alkalmazás
Ez a készlet a CHOK1 gazdasejt fehérje-maradékok tartalmának kvantitatív kimutatására szolgál a mintákban.
Ckomponensek
| S/N | Összetevő | Koncentráció | Tárolási feltételek |
| 1 | CHOK1 HCP szabvány | 0,5 mg/ml | ≤–20 ℃ |
| 2 | Anti-CHO HCP-HRP | 0,5 mg/ml | ≤-20 ℃, fénytől védve |
| 3 | TMB | NA | 2-8℃, fénytől védve |
| 4 | 20 × PBST 0,05% | NA | 2-8℃ |
| 5 | Állítsa le a megoldást | NA | RT |
| 6 | Mikrolemez tömítők | NA | RT |
| 7 | BSA | NA | 2-8℃ |
| 8 | Magas adszorpciós előbevonó lemezek | NA | 2-8℃ |
Felszerelés kötelező
| Fogyóeszközök / Berendezések | Gyártás | Katalógus |
| Mikrolemez olvasó | Molekuláris eszközök | Spectra Max M5, M5e vagy ezzel egyenértékű |
| Termomixer | Eppendorf | Eppendorf/5355 vagy azzal egyenértékű |
| Vortex keverő | IKA | MS3 Digital vagy azzal egyenértékű |
Tárolás és stabilitás
1.Szállítás -25~-15°C-on.
2.A tárolási feltételek az 1. táblázatban láthatók;Az 1-2 komponenseket ≤-20°C-on, az 5-6 komponenseket szobahőmérsékleten,3、4, 7, 8 2-8 ℃-on tárolják;érvényességi ideje 12 hónap.
A termék paraméterei
1.Érzékenység: 1ng/ml
2.Érzékelési tartomány: 3-100 ng/ml
3.Pontosság: Intra-assay CV ≤ 10%, inter-assay CV ≤ 15%
4.HCP lefedettség: >80%
5.Specifikusság: Ez a készlet univerzális, mivel specifikusan reagál a CHOK1 HCP-vel, függetlenül a tisztítási folyamattól.
Reagens előkészítése
1.PBST 0,05%
Vegyünk 15 ml 20×PBST 0,05%-ot ddH-val hígítva2O, és 300 ml-re töltjük fel.
2.1,0% BSA
Vegyen ki 1 g BSA-t az üvegből, és hígítsa fel 100 ml 0,05%-os PBST-vel, alaposan keverje össze, amíg teljesen fel nem oldódik, és tárolja 2-8°C-on.Az elkészített hígítópuffer 7 napig érvényes.Javasolt szükség szerint elkészíteni.
3.Detektáló oldat 2μg/mL
Vegyünk 48 µl 0,5 mg/ml Anti-CHO HCP-HRP-t, és hígítsuk fel 11 952 µl 1%-os BSA-val, hogy 2 µg/ml kimutatási oldatot kapjunk.
4.QC és CHOK1 HCP szabványok elkészítése
| Cső Nem. | Eredeti | Koncentráció | Hangerő | 1% BSA | teljes hangerő | Végső |
| A | Alapértelmezett | 0,5 mg/ml | 10 | 490 | 500 | 10 000 |
| B | A | 10 000 | 50 | 450 | 500 | 1000 |
| S1 | B | 1.000 | 50 | 450 | 500 | 100 |
| S2 | S1 | 100 | 300 | 100 | 400 | 75 |
| S3 | S2 | 75 | 200 | 175 | 375 | 40 |
| S4 | S3 | 40 | 150 | 350 | 500 | 12 |
| S5 | S4 | 12 | 200 | 200 | 400 | 6 |
| S6 | S5 | 6 | 200 | 200 | 400 | 3 |
| NC | NA | NA | NA | 200 | 200 | 0 |
| QC | S1 | 100 | 50 | 200 | 250 | 20 |
táblázat: A minőségellenőrzés és a szabványok elkészítése
A vizsgálati eljárás
1.Készítse elő a reagenseket a fenti „Reagens-előkészítés” részben leírtak szerint.
2.Vegyen 50 μL standardot, mintát és minőségellenőrzést (lásd a 3. táblázatot) minden egyes lyukba, majd adjon hozzá 100 μL kimutatási oldatot (2 μg/ml);Fedje le a lemezt tömítőanyaggal, és helyezze az ELISA lemezt a termomixerre.Inkubálja 500 ford./perc sebességgel, 25±3 ℃-on 2 órán át.
3.Fordítsa meg a mikrolemezt a mosogatóban, és dobja ki a bevonóoldatot.Pipettázzunk 300 µl 0,05%-os PBST-t mindegyik lyukba az ELISA lemez mosásához, és dobjuk ki az oldatot, és ismételjük meg a mosást háromszor.Fordítsa meg a tányért egy tiszta papírtörlőre, és törölje szárazra.
4.Adjon 100 μL TMB szubsztrátot (lásd 1. táblázat) minden egyes lyukba, zárja le az ELISA lemezt, és inkubálja sötétben 25±3 °C-on 15 percig.
5.Pipettázzunk 100 µl leállító oldatot mindegyik lyukba.
6.Mérje meg az abszorbanciát 450/650 nm hullámhosszon mikrolemez-leolvasóval.
7.Elemezze az adatokat SoftMax vagy azzal egyenértékű szoftver segítségével.Ábrázoljon standard görbét négyparaméteres logisztikus regressziós modell segítségével.
Szabványos görbe példa
MEGJEGYZÉS: Ha a mintában a HCP koncentrációja meghaladja a standard görbe felső határát, a vizsgálat előtt megfelelően hígítani kell hígító pufferrel.
MEGJEGYZÉSEK
A leállító oldat 2 M kénsav, kérjük, óvatosan kezelje, nehogy kifröccsenjen!
