BspQI
A BspQI rekombinánsan expresszálható E. coliban, amely képes felismerni specifikus helyeket, és alatt termelődik
A BspQI, egy IIs restrikciós endonukleáz restrikciós endonukleáz, egy rekombináns E. coli törzsből származik, amely a Bacillus sphaericus klónozott és módosított BspQI génjét hordozza.Bizonyos helyeket képes felismerni, a felismerési szekvencia és a hasítási helyek pedig a következők:
5' · · · ·GCTCTTC(N) · · · · · · · · · · · 3'
3' · · · · CGAGAAG(NNNN) · · · · 5'
A termék jellemzői
1. Magas aktivitás, gyors emésztés;
2. Alacsony csillagaktivitás, amely biztosítja a pontos vágást, mint a „szike”;
3. BSA nélkül és állati eredetű mentes;
Metilezési érzékenység
Dam metiláció:Nem érzékeny;
Dcm metiláció:Nem érzékeny;
CpG metilezés:Nem érzékeny;
Tárolási feltételek
A terméket ≤ 0 ℃ hőmérsékleten kell szállítani;-25-15°C-on tárolandó.
Tárolópuffer
20 mM Tris-HCl, 0,1 mM EDTA, 500 mM KCl, 1,0 mM ditiotreitol, 500 µg/ml rekombináns albumin, 0,1% Trition X-100 és 50% glicerin (pH 7,0 25 °C-on).
Mértékegység meghatározása
Egy egység az az enzimmennyiség, amely 1 µg belső kontroll DNS megemésztéséhez szükséges 1 óra alatt 50 °C-on 50 µl teljes reakciótérfogat mellett.
Minőség ellenőrzés
Fehérjetisztasági vizsgálat (SDS-PAGE):A BspQI tisztaságát SDS-PAGE analízissel ≥95%-ban határoztuk meg.
RNáz:10 egység BspQI 1,6 μg MS2 RNS-sel 4 órán át 50 °C-on nem eredményez degradációt, agaróz gélelektroforézissel meghatározva.
Nem specifikus DNS-aktivitás:10 egység BspQI 1 μg λ DNS-sel 50 °C-on 16 órán át, szemben az 50 °C-os 1 órás hőmérséklettel, nem eredményez DNS-felesleget, agarózgél-elektroforézissel meghatározva.
Lekötés és újravágás:1 μg λDNS 10U BspQI-vel történő emésztése után a DNS-fragmenseket T4 DNS-ligázzal ligáljuk 16ºC-on.És ezek a ligált fragmensek újravághatók BspQI-vel.
E. coli DNS: Az E. coli 16s rDNS-specifikus TaqMan qPCR kimutatása azt mutatta, hogy az E. coli genommaradéka ≤ 0,1 pg/ul.
Gazdafehérje maradék:≤ 50 ppm
Bakteriális Endotoxin: LAL-teszt, a Kínai Gyógyszerkönyv IV. 2020-as kiadása szerint, gélhatár vizsgálati módszer, általános szabály (1143).A bakteriális endotoxin tartalma ≤10 EU/mg legyen.
Reakciórendszer és feltételek
| Összetevő | Hangerő |
| BspQ I (10 U/μL) | 1 μL |
| DNS | 1 μg |
| 10 x BspQ I puffer | 5 μL |
| dd H2O | 50 μL-ig |
Reakciókörülmények: 50 ℃, 1-16 óra.
Hőinaktiválás: 80°C 20 percig.
Az ajánlott reakciórendszer és -körülmények viszonylag jó enzimemésztési hatást biztosítanak, ami csak tájékoztató jellegű, a részletekért lásd a kísérleti eredményeket.
Termék alkalmazása
Restrikciós endonukleáz emésztés, gyors klónozás.
Megjegyzések
1. Az enzim térfogata ≤ a reakciótérfogat 1/10-e.
2. A csillagaktivitás akkor fordulhat elő, ha a glicerin koncentrációja meghaladja az 5%-ot.
3. Hasítási aktivitás léphet fel, ha a szubsztrátum az ajánlott arány alatt van.
