Warm Start Bst 2.0 DNS-polimeráz (glicerinmentes)
A Bst DNS polimeráz V2 a Bacillus stearothermophilus DNS polimeráz I-ből származik, amely 5′→3′ DNS polimeráz aktivitással és erős láncpótló aktivitással rendelkezik, de nincs 5′→3′ exonukleáz aktivitása.A Bst DNA Polymerase V2 ideálisan alkalmas szálkiszorításra, izoterm amplifikációra, LAMP (Loop mediated izothermal amplifikáció) és gyors szekvenálásra.A Bst DNS polimeráz V2 egy reverzibilis módosítási technológiával előállított Bst DNS polimeráz V2 (HC5005A) alapú hot-start változat, amely szobahőmérsékleten gátolja a DNS polimeráz aktivitást, így a reakciórendszer szobahőmérsékleten üzemeltethető és formulázható, hogy megakadályozzuk -specifikus amplifikáció és javítja a reakció hatékonyságát, és ez a változat liofilizálható.Emellett aktivitása magas hőmérsékleten felszabadul, így nincs szükség külön aktiválási lépésre.
Alkatrészek
| Összetevő | HC5006A-01 | HC5006A-02 | HC5006A-03 |
Bst DNS polimeráz V2 (glicerinmentes) (8E/μL) | 0,2 ml | 1 ml | 10 ml |
| 10×HC Bst V2 puffer | 1,5 ml | 2×1,5 ml | 3×10 ml |
| MgSO4(100 mM) | 1,5 ml | 2×1,5 ml | 2×10 ml |
Alkalmazások
1.LAMP izoterm erősítés
2.Egy DNS-szál kiszorítási reakció
3.Magas GC génszekvenálás
4.A nanogramm szintű DNS szekvenálás.
Raktározási feltételek
Szállítás 0°C alatt és -25°C--15°C között tárolandó.
Mértékegység meghatározása
Egy egység az az enzimmennyiség, amely 65 °C-on 30 perc alatt 25 nmol dNTP-t épít be savban oldhatatlan anyagba.
Minőség ellenőrzés
1.Protein Purity Assay (SDS-PAGE):A Bst DNS polimeráz V2 tisztasága ≥99%-os SDS-PAGE analízissel Coomassie Blue detektálást alkalmazva.
2.EndonukleázTevékenység:A legalább 8 U Bst DNS polimeráz V2-t tartalmazó 50 μl-es reakció 1 μg λDNS-sel 16 órán át 37 ℃-on történő inkubálása nem eredményez kimutatható lebomlást a meghatározás szerint.
3.Exonukleáz aktivitás:A legalább 8 U Bst DNS polimeráz V2-t tartalmazó 50 μl-es reakciót 1 μg λ-Hind Ⅲ emésztett DNS-sel 16 órán át 37 ℃-on inkubálják, a meghatározás szerint nem észlelhető lebomlás.
4.Nickase tevékenység:A legalább 8 U Bst DNS polimeráz V2-t tartalmazó 50 μl-es reakció 1 μg pBR322 DNS-sel 16 órán át 37 °C-on történő inkubálása nem eredményez kimutatható lebomlást a meghatározás szerint.
5.RNáz aktivitás:A legalább 8 U Bst DNS polimeráz V2-t tartalmazó 50 μl-es reakció 1,6 μg MS2 RNS-sel 16 órán át 37 °C-on történő inkubálása nem eredményez kimutatható lebomlást a meghatározás szerint.
6.E. coliDNS:120 U Bst DNS polimeráz V2-t E. coli genomiális DNS jelenlétére szkrínelünk TaqMan qPCR alkalmazásával, az E. coli 16S rRNS lókuszra specifikus primerekkel.Az E. coli genomi DNS-szennyezettsége ≤1 Copy.
LÁMPA reakció
| Alkatrészek | 25μL |
| 10×HC Bst V2 puffer | 2,5 μL |
| MgSO4 (100 mM) | 1,5 μL |
| dNTP-k (egyenként 10 mM) | 3,5 μL |
| SYTO™ 16 zöld (25×)a | 1,0 μL |
| Alapozó keverékb | 6 μL |
| Bst DNS polimeráz V2 (glicerinmentes) (8 U/uL) | 1 μL |
| Sablon | × μL |
| ddH₂O | 25 μL-ig |
Megjegyzések:
1) a.SYTOTM 16 Green (25×): Kísérleti igények szerint más színezékek is használhatók helyettesítőként;
2) b.Primer keverék: 20 µM FIP, 20 µM BIP, 2,5 µM F3, 2,5 µM B3, 5 µM LF, 5 µM LB és egyéb térfogatok összekeverésével nyerjük.
Reakció és állapot
1 × HC Bst V2 puffer, az inkubációs hőmérséklet 60°C és 65°C között van.
Hő inaktiválása
80°C, 20 perc
