Ultra Nuclease
Az UltraNuclease a Serratia marcescensből származó, genetikailag módosított endonukleáz, amely képes a DNS vagy RNS lebontására, akár kettős, akár egyszálú, lineáris vagy cirkuláris körülmények között, a nukleinsavakat teljesen lebontja 5'-monofoszfát oligonukleotidokra, 3-5 bázis hosszúságú. .A géntechnológiai módosítást követően a terméket Escherichia coliban (E. coli) fermentálták, expresszálták és tisztították, ami csökkenti a sejtfelülúszó és a sejtlizátum viszkozitását, de javítja a fehérje tisztítási hatékonyságát és funkcionális kutatását is.Használható a génterápiában, vírustisztításban, vakcinagyártásban, fehérje- és poliszacharid gyógyszeriparban is, mint gazdamaradék nukleinsav eltávolító reagens.
A termék jellemzői
| CAS-szám | 9025-65-4 |
| EK sz. | |
| Molekuláris tömeg | 30 kDa |
| Izoelektromos pont | 6.85 |
| Fehérje tisztaság | ≥99% (SDS-PAGE és SEC-HPLC) |
| Specifikus tevékenység | ≥1.1×106E/mg |
| Optimális hőmérséklet | 37°C |
| Optimális pH | 8.0 |
| ProteaseActivity | negatív |
| Bioburden | ＜10 CFU/100 000 U |
| Maradék gazdasejt fehérje | ≤10 ppm |
| Heavy metal | ≤10 ppm |
| Bakteriális endotoxin | ＜0,25EU/1000U |
| Tárolópuffer | 20 mM Tris-HCl, pH 8,0, 2 mM MgCl2, 20 mM NaCl, 50% glicerin |
Tárolási feltételek
≤0°C szállítás；-25~-15°C Tárolás, 2 év érvényességi idő (elkerülje a fagyasztást-olvadást).
Mértékegység meghatározása
A △A260 abszorpciós értékének 30 percen belüli 1,0-val történő megváltoztatásához használt enzim mennyiségét 37 °C-on, pH 8,0-nál, ami egyenértékű 37 μg lazac spermium DNS-sel emésztett oligonukleotidokra vágva, aktív egységként (U) határozták meg.
Minőség ellenőrzés
Maradék gazdasejt fehérje: ELISA készlet
•Proteáz Maradékok: 250 KU/mL UltraNuclease reagált a szubsztráttal 60 percig, aktivitást nem észleltünk.
•Bakteriális endotoxin: LAL-Test, Pharmacopoeia of the People's Republic of China, 4. kötet (2020-as kiadás) gél határérték vizsgálati módszer.Általános szabályok (1143).
•Bioterhelés: A Kínai Népköztársaság Gyógyszerkönyve 4. kötet (2020-as kiadás) – Általános
A sterilitási teszt szabályai (1101), PRC nemzeti szabvány, GB 4789.2-2016.
•Heavy metal:ICP-AES, HJ776-2015.
Művelet
Az UltraNuclease aktivitás szignifikánsan gátolt, ha az SDS vagy az EDTA koncentrációja 0,1% felett volt
koncentrációja 1 mM felett volt. A Triton X-100, Tween 20 és Tween 80 felületaktív anyagoknak nincs hatása a nukleázra
tulajdonságai, ha a koncentráció 1,5% alatt volt.
| Művelet | Optimális működés | Érvényes működés |
| Hőfok | 37℃ | 0-45℃ |
| pH | 8,0-9,2 | 6,0-11,0 |
| Mg2+ | 1-2 mM | 1-15 mM |
| DTT | 0-100 mM | >100 mM |
| 2-merkaptoetanol | 0-100 mM | >100 mM |
| Egyértékű fémion (Na+, K+ stb.) | 0-20 mM | 0-200 mM |
| PO43- | 0-10 mM | 0-100 mM |
Használat és adagolás
• Távolítsa el az exogén nukleinsavat a vakcinakészítményekből, csökkentse a maradék nukleinsav-toxicitás kockázatát és javítsa a termékbiztonságot.
• Csökkenti a tápfolyadék nukleinsav okozta viszkozitását, lerövidíti a feldolgozási időt és növeli a fehérjehozamot.
• Távolítsa el a nukleinsavat, amely beburkolta a részecskét (vírus, zárványtest stb.), amely elősegíti
a részecske felszabadulásához és tisztításához.
| Kísérleti típus | Fehérjetermelés | Vírus, vakcina | Sejtgyógyszerek |
| Cellák száma | 1g sejt nedves tömeg (10 ml pufferrel újra szuszpendálva) | 1L fermentáció folyékony felülúszó | 1 liter tenyészet |
| Minimális adagolás | 250U | 100U | 100U |
| Ajánlott adagolás | 2500U | 25000U | 5000U |
• A nukleázkezelés javíthatja a minta felbontását és visszanyerését az oszlopkromatográfiához, elektroforézishez és blotting analízishez.
• A génterápia során a nukleinsavat eltávolítják, hogy tisztított adeno-asszociált vírusokat kapjanak.
