RT-LAMP Colormetric Master Mix HCB5204A
Ez a termék reakciópuffert, RT-enzimkeveréket (Bst DNS polimeráz és hőálló reverz transzkriptáz), liofilizált védőanyagokat és kromogén festékkomponenseket tartalmaz.A használathoz csak használjon puffert, a reakcióenzimet és a primert összekeverjük és hozzáadjuk a templáthoz;liofilizált védőanyag hozzáadása lehet egyenes.Egy liofilizáló készülékhez kapcsolták és liofilizálják, és csak a primereket és a templátokat adták hozzá használatkor.Ez a készlet az amplifikáció gyors, világos vizuális észlelését biztosítja, amely negatív reakciót pirossal, a pozitív reakciót pedig sárgára váltás jelzi.
Összetevő
| Összetevő | HCB5204A-01 | HCB5204A-02 | HCB5204A-03 |
| Hurok által közvetített amplifikációs puffer (festékkel) | 0,96 ml | 4,80 ml × 2 | 9,60 ml × 10 |
| RT-enzimek keveréke | 270 μl | 2,70 ml | 2,70 ml × 10 |
| Liofilizált védőanyag | 0,96 ml × 2 | 9,60 ml × 2 | 9,60 ml × 20 |
Alkalmazások
DNS vagy RNS izoterm amplifikációhoz.
Tárolási feltételek
Szárazjéggel szállítva, -25 ~ -15 ℃ között tárolva.Kerülje a gyakori fagyasztást-olvadást, a termék 12 hónapig érvényes.
Jegyzőkönyv
1.A felhasználandó reakciópuffert szobahőmérsékleten felolvasztjuk.Röviden vortexelje vagy fordítsa meg a csöveket többször, hogy alaposan elkeveredjen, majd centrifugálja, hogy a folyadék a cső aljára gyűjtse.
2.Reakciórendszer készítése.Ez a reagens két reakciórendszerben állítható elő: folyékony reakcióelegyben és liofilizált rendszerkeverékben.
1) Készítse elő a folyékony reakciókeveréket
| Összetevő | Hangerő |
| Hurok által közvetített amplifikációs puffer (festékkel) | 10 μL |
| RT-enzimek keveréke | 2,8 μL |
| 10 × Primer Mixa | 5 μL |
| DNS/RNS sablonok b | × μL |
| Nukleázmentes víz | 50 μL-ig |
2) Liofilizációs rendszer keverék
① Készítse elő a liofilizált keveréket
| Összetevő | Hangerő |
| Hurok által közvetített amplifikációs puffer (festékkel) | 10 μL |
| Liofilizált védőanyag | 20 μL |
| RT-enzimek keveréke | 2,8 μL |
| Nukleázmentes víz | 50 μL-ig |
② Liofilizálás: Az elkészített keveréket 50 μl-es rendszerben liofilizáltuk.
③ Készítse elő a reakcióelegyet
| Összetevő | Hangerő |
| Liofilizált keverék | 1 darab |
| 10 × Primer Mixa | 5 μL |
| DNS/RNS sablonok b | × μL |
| Nukleázmentes víz | 50 μL-ig |
Megjegyzések:
1) a.10×Primer Mix: 16 μM FIP/BIP, 2 μM F3/B3, 4 μM Loop F/B;
2) b.A DEPC (vízoldható) nukleinsav templ esetén javasolt.
1.Inkubálja 65°C-on 30-45 percig, amely a színváltozás függvényében megfelelően meghosszabbítható. A reakcióidő.
2.Szabad szemmel a sárga pozitív, a piros pedig negatív volt.
Megjegyzések
1.Só jelenhet meg a puffercső alján, röviden vortexelje vagy többször fordítsa meg a csöveket, hogy szobahőmérsékleten alaposan elkeveredjen.
2.A reakcióhőmérséklet 62 ℃ és 68 ℃ között optimalizálható a primerek állapotától függően.
3.A becsomagolt reagenseket nem szabad hosszú ideig levegőnek kitenni.
4.A vörös és sárga elszíneződési reakció a reakciórendszer pH változásától függ, kérjük, ne használja a Tris nukleinsav tároló oldatot, ajánlott ddH használata2O tárolt nukleinsav;
5.A kísérletet szabványosítani kell, beleértve a reakciórendszer elkészítését, a liofilizálást, valamint a mintafeldolgozást és a minta hozzáadása folyamatát;
6.A szennyeződés elkerülése érdekében ajánlatos a reakciórendszert egy ultra-tiszta munkaasztalon előkészíteni, más esetekben a hamis pozitív interferencia elkerülése érdekében adjon sablonokat a helyiség elszívóernyőjéhez.
