One Step Fast RT-qPCR Probe Premix-UNG
Katalógusszám: HCR5143A
Az One Step RT-qPCR Probe Kit (FOR FAST) egy próba alapú RT-qPCR gyorsdetektáló készlet, amely alkalmas egy- vagy multiplex kvantitatív PCR-re, RNS-t templátként használva (például RNS-vírus).Ez a termék az antitesttel módosított Taq DNS-polimeráz új generációját és az egylépéses dedikált reverz transzkriptázt használja, optimalizált pufferrel a gyors amplifikáció érdekében, amely gyorsabb amplifikációs sebességgel, nagyobb amplifikációs hatékonysággal és specificitással rendelkezik.Támogatja a kiegyensúlyozott amplifikációt mind az egyszeri, mind a multiplex alacsony és nagy koncentrációjú mintákban, rövid időn belül.
Alkatrészek
1. 5×RT-qPCR puffer (U+)
2. Enzimkeverék (U+)
Megjegyzések:
a.Az 5×RT-qPCR puffer (U+) dNTP-t és Mg-t tartalmaz2+;
b.Az enzimkeverék (U+) magában foglalja a reverz transzkriptázt, a Hot Start Taq DNS polimerázt, az RNáz inhibitort és az UDG-t;
c.Használjon RNase-mentes hegyeket, EP csöveket stb.
Használat előtt alaposan keverje össze az 5×RT-qPCR puffert (U+).Ha a felolvasztás után csapadék keletkezik, várja meg, amíg a puffer szobahőmérsékletre melegszik, keverje össze és oldja fel, majd használja a szokásos módon.
Tárolási feltételek
A terméket szárazjéggel szállítjuk, és -25 ~ -15 ℃ között 1 évig tárolható.
Utasítás
1. Reakció Rendszer
| Alkatrészek | Térfogat (20 μL reakció) |
| 2 × RT-qPCR puffer | 4μL |
| Enzimkeverék (U+) | 0,8μL |
| Primer Forward | 0,1-1,0 μM |
| Primer Reverse | 0,1-1,0 μM |
| TaqMan szonda | 0,05-0,25 μM |
| Sablon | X μL |
| RNáz-mentes víz | 25μL-ig |
Megjegyzések: A reakciótérfogat 10-50 μL.
2. Kerékpározási protokoll (Standar)
| Ciklus lépés | Temp. | Idő | Ciklusok |
| Fordított átírás | 55 ℃ | 10 perc | 1 |
| Kezdeti denaturáció | 95 ℃ | 30 mp | 1 |
| Denaturáció | 95 ℃ | 10 mp | 45 |
| Lágyítás/kiterjesztés | 60 ℃ | 30 mp |
| Kerékpáros Protokoll (Gyors) Ciklus lépés |
Temp. |
Idő |
Ciklusok |
| Fordított átírás | 55 ℃ | 5 perc | 1 |
| Kezdeti denaturáció | 95 ℃ | 5 s | 1 |
| Denaturáció | 95 ℃ | 3 s | 43 |
| Lágyítás/kiterjesztés | 60 ℃ | 10 s |
Megjegyzések:
a.A fordított transzkripció hőmérséklete 50 ℃ és 60 ℃ között van, a hőmérséklet növelése elősegíti a komplex struktúrák és a magas CG-tartalmú sablonok felerősítését;
b.Az optimális hőkezelési hőmérsékletet a primer Tm-értéke alapján kell beállítani, és a valós idejű PCR-műszer alapján ki kell választani a fluoreszcens jelek gyűjtésének legrövidebb idejét.
Megjegyzések
Kérjük, hogy egészsége és biztonsága érdekében viselje a szükséges PPE-t, például laborköpenyt és kesztyűt!
