DNáz I
A DNáz I (dezoxiribonukleáz I) egy endodezoxiribonukleáz, amely képes megemészteni az egy- vagy kétszálú DNS-t.Felismeri és felbontja a foszfodiészter kötéseket, így monodezoxinukleotidokat vagy egy- vagy kétszálú oligodezoxinukleotidokat hoz létre, amelyek 5'-terminálisán foszfátcsoportok, 3'-terminálisán hidroxilcsoportok találhatók.A DNáz I aktivitása a Ca2+-tól függ, és kétértékű fémionok, például Mn2+ és Zn2+ aktiválhatják.Az 5 mM Ca2+ megvédi az enzimet a hidrolízistől.Mg2+ jelenlétében az enzim véletlenszerűen képes felismerni és hasítani bármely helyet a DNS bármely szálán.Mn2+ jelenlétében a DNS kettős szálai egyidejűleg felismerhetők és szinte ugyanazon a helyen hasíthatók, így lapos végű DNS-fragmensek vagy ragadós végű DNS-fragmensek képződnek, amelyekből 1-2 nukleotid nyúlik ki.
Terméktulajdonság
Szarvasmarha hasnyálmirigy DNáz I-t élesztő expressziós rendszerben expresszáltuk és tisztítottuk.
Ckomponensek
| Összetevő | Hangerő | |||
| 0,1 KU | 1KU | 5KU | 50 KU | |
| DNáz I, RNáz mentes | 20μL | 200 μl | 1 ml | 10 ml |
| 10×DNáz I puffer | 1 ml | 1 ml | 5 × 1 ml | 5×10 ml |
Szállítás és tárolás
1. Tárolási stabilitás: – 15 ℃ ~ -25 ℃ tárolás esetén;
2. Szállítási stabilitás: Szállítás jégtakaró alatt;
3. Kiszerelés: 10 mM Tris-HCl, 2 mM CaCl2, 50% glicerin, pH 7,6 25 ℃-on.
Mértékegység meghatározása
Egy egység az enzim azon mennyisége, amely 37 °C-on 10 perc alatt teljesen lebontja 1 µg pBR322 DNS-t.
Minőség ellenőrzés
RNáz:5 U DNáz I 1,6 μg MS2 RNS-sel 4 órán át 37 ℃-on nem eredményez degradációt, agaróz gélelektroforézissel meghatározva.
Bakteriális Endotoxin:LAL-teszt, a Kínai Gyógyszerkönyv IV. 2020-as kiadása szerint, gélhatár vizsgálati módszer, általános szabály (1143).A bakteriális endotoxin tartalma ≤10 EU/mg legyen.
Használati útmutató
1. Készítse elő a reakcióoldatot az RNáz-mentes csőben az alábbi arányok szerint:
| Összetevő | Hangerő |
| RNS | X μg |
| 10 × DNáz I puffer | 1 μL |
| DNáz I, RNáz-mentes (5U/μL) | 1 U μg RNS-enként |
| ddH2O | 10 μL-ig |
2,37 ℃ 15 percig;
3. Adja hozzá a terminációs puffert a reakció leállításához, és melegítse 65 °C-on 10 percig a DNáz I inaktiválásához. A minta közvetlenül felhasználható a következő transzkripciós kísérlethez.
Megjegyzések
1. Használjon 1 U DNáz I-et μg RNS-enként, vagy 1 U DNáz I-et kevesebb mint 1 μg RNS esetén.
2. EDTA-t kell hozzáadni 5 mM végső koncentrációig, hogy megvédjük az RNS-t az enziminaktiválás során bekövetkező lebomlástól.
