5×Neoscript Fast RT-qPCR Premix plus-UNG
Katalógusszám: HCB5142A
A Neoscript Fast RT Premix-UNG (Probe qRT-PCR) egy rendkívül stabil, egycsöves szonda alapú keverék, amely alkalmas egylépéses reverz transzkripcióra és kvantitatív PCR-re (qRT-PCR).Támogatja az alapozók és szondák előkeverését, és stabil marad hosszú ideig tartó alacsony hőmérsékleten történő tárolás után.A vizsgálandó minta közvetlenül hozzáadható használat közben, további csőnyitás/pipettázás nélkül.Ez a termék olyan összetevőket tartalmaz, mint például a hot-start DNS polimeráz, M-MLV, hőre labilis uracil DNS glikoziláz (TS-UNG), RNáz inhibitor, MgCl2, dNTP-k (dTTP helyett dUTP-vel) és stabilizátorok.A genetikailag módosított gyors amplifikációs reverz transzkriptázzal és DNS polimerázzal 20-40 percen belül lehetséges a PCR amplifikáció.Ez a reagens speciális puffert használ a qPCR-hez anti-inhibitor amplifikációs enzim és UNG enzim kevert enzimeivel.Ezért képes jó amplifikációt elérni a célgénekben, és megakadályozni a PCR maradék és aeroszolszennyezés által okozott hamis amplifikációt.Ez a reagens kompatibilis a legtöbb fluoreszcens kvantitatív PCR műszerrel olyan gyártóktól, mint az Applied Biosystems, az Eppendorf, a Bio-Rad és a Roche.
Összetevő
1.25×Neoscript Fast RTase/UNG Mix
2.5 × Neoscript Fast RT Premix Buffer (dUTP)
Tárolási feltételek
Minden alkatrészt -20 ℃ hőmérsékleten kell tárolni a hosszú távú tároláshoz és 4 ℃ hőmérsékleten legfeljebb 3 hónapig.Felolvasztás után alaposan keverje össze, és felhasználás előtt centrifugálja meg.Kerülje a gyakori fagyasztást-olvadást.
qRT-PCR reakciórendszer előkészítése
| Alkatrészek | 25μLRendszer | 50μLRendszer | Végső koncentráció |
| 5 × Neoscript Fast RT Premix Buffer (dUTP) | 5μL | 10μL | 1× |
| 25×Neoscript Fast RTase/UNG Mix | 1 μL | 2μL | 1× |
| 25× Primer-Probe Mixa | 1 μL | 2μL | 1× |
| Templát RNSb | – | – | – |
| ddH2O | 25μL-ig | 50μL-ig | – |
1) a.A primer végső koncentrációja általában 0,2 μM.A jobb eredmények érdekében a primer koncentrációja 0,2-1 μM tartományban optimalizálható.Általában a próbakoncentráció 0,1-0,3 μM tartományban optimalizálható.
2) b. Gyors PCR eljárás használatakor a primerek és próbák koncentrációjának növelése jobb amplifikációs eredményeket eredményezhet, és arányukat ennek megfelelően kell optimalizálni.
3) A különböző típusú minták különböző típusú és tartalmú inhibitorokat és a célgén kópiaszámát tartalmazzák.A minta térfogatát a tényleges állapot szerint kell figyelembe venni.Ha szükséges, hígítsa fel a mintát nukleázmentes vízzel vagy TE-pufferrel.
C reakciófeltételek
| Rendszeres PCR eljárás | Gyors PCR eljárás | ||||||
| Eljárás | Temp. | Idő | Ciklus | Eljárás | Temp. | Idő | Ciklus |
| Fordított átírás | 50℃ | 10-20 perc | 1 | Fordított átírás | 50℃ | 5 perc | 1 |
| Polimeráz Aktiválás | 95℃ | 1-5 perc | 1 | Polimeráz Aktiválás | 95℃ | 30-as évek | 1 |
| Denaturáció | 95℃ | 10-20 s | 40-50 | Denaturáció | 95℃ | 1-3s | 40-50 |
| Lágyítás és Kiterjesztés | 56-64 ℃ | 20-60-as évek | Lágyítás és Kiterjesztés | 56-64 ℃ | 3-20 s | ||
Minőség ellenőrzés
1.Funkciódetektálás: a qPCR érzékenysége, specificitása és ismételhetősége.
2.Nincs exogén nukleáz aktivitás: nincs exogén endonukleáz és exonukleáz szennyezés.
Megjegyzések
1.A gyors DNS polimeráz amplifikációs sebessége nem kevesebb, mint 1 kb/10 s.A különböző PCR-műszerek eltérő fűtési és hűtési sebességgel, hőmérséklet-szabályozási móddal és hővezető képességgel rendelkeznek, ezért alapvető fontosságú a primer/szonda koncentrációjának és a futtatási módszerének optimalizálása az adott gyors PCR-műszerrel kombinálva.
2.Ez a termék széles körben alkalmazható, és alkalmas nagy érzékenységű molekuláris diagnosztikára.A háromlépcsős PCR-módszer alacsony kapcsolódási hőmérsékletű primerekhez vagy 200 bp feletti hosszú fragmentumok amplifikálásához ajánlott.
3.Mivel a különböző amplikonoknak eltérő a dUTP felhasználási hatékonysága és eltérő az UNG-re való érzékenysége, a reagenseket optimalizálni kell, ha az észlelési érzékenység csökken az UNG rendszer használatakor.Ha szükséges, forduljon hozzánk technikai támogatásért.
4.Az átviteli PCR termékek amplifikációjának elkerülése érdekében külön kísérleti területre és pipettára van szükség az amplifikációhoz.Kesztyűben dolgozzon, és gyakran cserélje ki, és ne nyissa ki a PCR csövet az amplifikáció után.
